Оставьте ссылку на эту страницу в соцсетях:

Поиск по базе документов:

 

УТВЕРЖДЕНЫ

Постоянным комитетом

по контролю наркотиков

24 ноября 2004 г.,

протокол N 7/96-2004

 

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕКОТОРЫХ НАРКОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ

МЕТОДАМИ ГАЗОВОЙ, ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

И УФ-СПЕКТРОСКОПИИ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

 

Утверждены Постоянным комитетом по контролю наркотиков, 24.11.04, протокол N 7/96-2004.

Одобрены и рекомендованы к опубликованию Методическим и Редакционно-издательским советами ЭКЦ МВД России.

 

При квалификации уголовных дел, связанных с наркотиками, важную роль играют вид и количество изъятого наркотического средства. При исследовании наркотических средств растительного происхождения объекты исследования высушивают при температуре 110 град. С до постоянной массы, а затем определяют количество взвешиванием. При исследовании синтетических наркотических средств такой подход невозможен, так как эти наркотики представляют собой различные смеси, растворы или наносятся на предметы-носители.

Синтетические наркотические средства (такие, как метадон, фенциклидин, 3-метил-фентанил, пентазоцин, бупренорфин, метаквалон и др.) в последние годы занимают все большее место в незаконном обороте. Это наркотические средства в виде белых кристаллических порошков, растворов, нанесенных на салфетки, смесей с различными растительными материалами, которые синтезируются нелегально или поступают в незаконный оборот как лекарственные препараты.

В экспертно-криминалистических подразделениях (ЭКП) органов внутренних дел России производство экспертиз по количественному определению синтетических наркотических средств затруднено ввиду недостаточного методического обеспечения и отсутствия образцов сравнения. Для некоторых наркотических средств в ЭКЦ МВД России были разработаны методики их качественного выявления, но методики количественного определения по некоторым причинам отсутствуют.

Авторским коллективом разработаны методики количественного определения наиболее распространенных в России синтетических наркотических средств с помощью традиционно используемых в ЭКП органов внутренних дел методов УФ-спектроскопии, жидкостной и газовой хроматографии.

 

Объекты исследования

 

Опий (терьяк, опиюха, султыга, черняшка, химканка, симпляк) - свернувшийся млечный сок опийного или масличного мака. Представляет собой вязкую или твердую массу темно-бурого цвета со специфическим запахом. Содержит наркотически активные алкалоиды - морфин, кодеин и тебаин. Употребляют, как правило, в виде растворов - перорально (через рот), внутривенно, в некоторых регионах распространено курение. Разовая доза - примерно 100 мг.

Метадон (Dollies, фенадон, "лошадка") - синтетическое наркотическое средство, впервые полученное в 1942 г. фирмой Hoechst (Германия). Встречается, как правило, в виде порошков, иногда в виде растворов и редко - таблеток, в некоторых странах входит в состав фармацевтических препаратов. Распространен в смесях с различными веществами (димедрол, новокаин, новокаинамид). Аналогичен по действию морфину, анальгетик, но более продолжительного действия (до 24 ч). При употреблении метадона возникает состояние эйфории, сопровождаемое сонливостью, угнетением дыхания, невнятной речью, ухудшением концентрации внимания или памяти и снижением способности к суждению. Употребляют чаще внутривенно, иногда перорально. Разовая доза - 10 мг. Употребление вызывает физическую зависимость.

В некоторых странах, например в Голландии, метадон используют при лечении героиномании в рамках так называемой "метадоновой программы".

Бупренорфин (норфин, торгесик, анфин, Buprenex, Temgesic) - синтетическое наркотическое средство, получаемое из тебаина. Входит в состав таблеток, а также выпускается в виде раствора в ампулах (в качестве добавки содержит сахара). Широко используется в онкологии как обезболивающее средство. Время действия бупренорфина - 6-8 ч. Разовая доза - 0,2-0,6 мг. Обезболивающее действие бупренорфина сильнее, чем морфина, примерно в 30 раз. При употреблении бупренорфина наблюдаются сонливость, тошнота, рвота, головокружение, иногда угнетение дыхания.

В Россию лекарственный препарат, содержащий бупренорфин, поступает в основном из Индии.

Метаквалон (смесь метаквалона с димедролом называется Mandrax). Встречается в виде таблеток или порошка коричневого, серого или черного цвета, содержание основного вещества в которых составляет 30-70%. В качестве добавки к метаквалону, как правило, используют димедрол. Кроме того, метаквалон является распространенной добавкой к героину. Обладает снотворным и успокаивающим действием в течение 4-8 ч. Разовая доза - около 300 мг.

Впервые был синтезирован в 1951 г., в 1965 г. начал использоваться в фармацевтике в качестве успокоительного средства как заменитель барбитуратов. С 1984 г. в США прекращено его легальное производство.

Существует два основных источника поступления метаквалона в нелегальный оборот: аптечная сеть и производство в подпольных лабораториях. Одним из основных нелегальных производителей метаквалона является Индия.

Пентазоцин (фортрал, тальвин) - анальгетик, который по активности и длительности действия уступает морфину. Распространенной добавкой к нему является трипеленамин. Употребляют перорально или в виде инъекций, возможно курение и вдыхание. При употреблении пентазоцина наблюдаются сонливость, тошнота, рвота, головокружение, состояние эйфории, расслабленности и помутнение сознания, может возникать острый психоз (кошмары и зрительные галлюцинации). При высоких дозах возможно угнетение дыхания. Время действия пентазоцина - 3-4 ч. Разовая доза - 50-100 мг.

В незаконном обороте с 1967 г.

Фенциклидин (РСР, Angel Dust, Peace Pill, Hog, Supergrass, Killer Weed, Rocket Fuel, Embalming Fluid, Sherms, Magic Wack, Sunshine, Cool, Chrystals). Встречается в виде порошков различного цвета, жидкостей, таблеток, капсул. В форме основания может наноситься на бумажные носители, а также на табак, мяту, петрушку, марихуану. Был разработан в 1954 г. для использования в качестве анестезирующего средства. Употребляют перорально, внутривенно, возможно вдыхание, но чаще курение. При употреблении фенциклидина наблюдаются состояние эйфории, звенящие, плавающие ощущения и чувство спокойного уединения. Могут появляться звуковые и зрительные галлюцинации, искаженное восприятие пространства и времени, иллюзии и неупорядоченность мыслей. Симптомы, возникающие при употреблении, зависят от дозы и включают пониженную реакцию на боль, напряжение мышц, судороги, обильное потоотделение. Время действия наркотика - 4-6 ч, хотя исчезновение остаточных явлений может продолжаться несколько дней. Разовая доза - 5 мг.

Фенциклидин является одним из самых опасных наркотиков, так как его употребление приводит к серьезным и необратимым изменениям в физическом и психическом состоянии человека.

Применение фенциклидина в медицинской практике запрещено, так как его прием вызывает случаи помешательства, белой горячки и смерть.

В незаконном обороте появился в 1967 г.

3-метилфентанил (Persian White, Syntetic heroin, "стекло") - синтетический анальгетик, являющийся производным фентанила. Существует в виде двух пространственных изомеров (цис- и транс-), обладающих различной активностью (суммарная концентрация этих изомеров в растворе - примерно 0,0024%). Распространяется в виде бесцветной прозрачной жидкости в стеклянных ампулах (с явными следами перепайки) из-под новокаина, новокаинамида, хлорида натрия изотонического, сульфата магния и т.д. Действие его, как и других аналогов фентанила, подобно действию опиатов, т.е. 3-метилфентанил обладает сильным аналгезирующим действием (цис-триметилфентанил в 5500 раз активнее морфина). Употребляют внутривенно, возможно курение или вдыхание, а также нанесение его на пластырь, который потом накладывают на кожу, а 3-метилфентанил всасывается через нее в организм. При употреблении наблюдается сужение зрачков, угнетение дыхания. Действие 3-метилфентанила начинается практически сразу после приема (так, при внутривенном введении уже через 2 мин. наступает состояние расслабленности и эйфории). Время действия 3-метилфентанила - около 4 ч.

При употреблении 3-метилфентанила из-за его высокой активности и низкой разовой дозы велика опасность передозировки. Регулярное употребление 3-метилфентанила вызывает физическую зависимость.

Впервые на нелегальном рынке 3-метилфентанил появился в 1983 г. в США под названием Persian White. В России появление 3-метилфентанила было отмечено первый раз в 1990 г. в Санкт-Петербурге, однако тогда он не получил широкого распространения. В 1991-1992 гг. 3-метилфентанил в больших количествах появился в Москве.

В последние годы с употреблением 3-метилфентанила в США связывают большое количество смертельных случаев.

Лизергид - диэтиламид лизергиновой кислоты (ЛСД, ЛСД-25, "кислота"). Встречается, как правило, в виде импрегнированной бумаги, разделенной на отдельные фрагменты перфорацией (на каждый из фрагментов либо на весь лист бумаги нанесен рисунок); реже - в виде таблеток или желатиновых капсул. Употребляют перорально.

Лизергид обладает галлюциногенным действием. Это один из самых сильных галлюциногенов - его активность выше активности псилоцина и псилоцибина в 100 раз.

Потребление лизергида сопровождается расширением зрачков, повышением температуры тела, повышением кровяного давления, мышечной слабостью, повышенным потоотделением, нарушением зрения и беспокойным поведением. Негативные последствия приема лизергида заключаются в психологических и психотических травмах, а также в не поддающихся контролю галлюцинациях, неожиданно проявляющихся спустя значительное время после приема.

Впервые лизергид синтезирован в 1938 г. А.Хофманом (Германия).

Эффективные дозы, время действия некоторых наркотических средств, а также их физические свойства представлены в табл. 1.

 

Таблица 1

 

НЕКОТОРЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАРКОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ

 

┌───────────┬─────────┬──────┬─────────────────┬─────────────┬─────┬──────┐

│ Вещество  │Эффектив-│Время │    Основание    │ Гидрохлорид │Моле-│Струк-│

           │ная      │дейст-│   (при н.у.)    │ (при н.у.)  │ку-  │турная│

           │доза, мг │вия, ч│                              │ляр- │форму-│

                                                        │ная  │ла (не│

                                                        │масса│приво-│

                                                             │дится)│

├───────────┼─────────┼──────┼─────────────────┼─────────────┼─────┼──────┤

│Метадон        10   │До 24 │Кристаллическое  │Кристалличес-│309,5│     

                          │вещество,        │кое вещество,│          

                          │Т   = 76 -       │Т   = 233 -            

                          │ пл              │ пл                    

                          │79 град. С       │236 град. С            

├───────────┼─────────┼──────┼─────────────────┼─────────────┼─────┼──────┤

│Метаквалон │   300   │4-8   │Кристаллическое  │Кристалличес-│250,3│     

                          │вещество,        │кое вещество,│          

                          │Т   = 114 -      │Т   = 255 -            

                          │ пл              │ пл                    

                          │117 град. С      │265 град. С            

├───────────┼─────────┼──────┼─────────────────┼─────────────┼─────┼──────┤

│3-метил-   │Нет      │4     │Кристаллическое  │Кристалличес-│350,5│     

│фентанил   │сведений │      │вещество,        │кое вещество │          

                          │Т   = 151 -                             

                          │ пл                                     

                          │161 град. С                             

├───────────┼─────────┼──────┼─────────────────┼─────────────┼─────┼──────┤

│Фенциклидин│     5   │4-6   │Кристаллическое  │Кристалличес-│243,4│     

                          │вещество,        │кое вещество,│          

                          │Т   = 46 -       │Т   = 233 -            

                          │ пл              │ пл                    

                          │46,5 град. С     │235 град. С            

├───────────┼─────────┼──────┼─────────────────┼─────────────┼─────┼──────┤

│Пентазоцин │30-50    │Нет   │Кристаллическое  │Кристалличес-│285,4│     

                    │сведе-│вещество,        │кое вещество,│          

                    │ний   │Т   = 145,4 -    │Т   = 218              

                          │ пл              │ пл                    

                          │147,2 град. С    │(254) град. С│          

                                           │в зависимости│          

                                           │от формы               

                                           │кристаллов             

├───────────┼─────────┼──────┼─────────────────┼─────────────┼─────┼──────┤

│Бупренорфин│0,3-0,6  │6-8   │Кристалличес-    │Кристалличес-│467,7│     

                          │кое вещество,    │кое вещество │          

                          │Т   = 209 град. С│                       

                          │ пл                                     

├───────────┼─────────┼──────┼─────────────────┼─────────────┼─────┼──────┤

│Лизергид   │0,025-   │8-12  │Кристаллическое  │Тартрат -    │323,4│     

           │0,080          │вещество,        │кристалличес-│          

                          │Т   = 80 -       │кое вещество,│          

                          │ пл              │Т   = 198 -            

                          │85 град. С       │ пл                    

                                           │200 град. С            

└───────────┴─────────┴──────┴─────────────────┴─────────────┴─────┴──────┘

 

Методики экспертного исследования

 

Исследование наркотических средств, сильнодействующих, ядовитых и психотропных веществ, как правило, разделяется на качественное (химическая идентификация вещества) и количественное.

При количественном определении особенно важно, чтобы отобранная для исследования часть вещества являлась представительной пробой <*>. В связи с этим необходимо соблюдать правила отбора проб <**>.

--------------------------------

<*> Наркотические средства в виде таблеток или вещества растительного происхождения предварительно тщательно измельчают в ступке, жидкости гомогенизируют встряхиванием.

<**> См.: Методические рекомендации "Отбор проб при исследовании наркотических средств" (сост.: В.И.Сорокин, Е.П.Семкин, А.В.Беляев), утвержденные протоколом Постоянного комитета по контролю наркотиков от 16 ноября 1993 г. N 26.

 

Исследование методом газовой хроматографии

 

Метод газовой хроматографии является самым распространенным для количественного определения наркотических средств в ЭКП органов внутренних дел.

В качестве внутреннего стандарта используют метилстеарат; для этого пригодны и другие вещества.

 

Исследование морфина и кодеина в опии

 

Около 300 мг опия помещают в мерную колбу на 100 мл (твердое вещество предварительно измельчают), добавляют 50 мл метанола, нагревают до кипения и выдерживают при этой температуре в течение 30 мин. Содержимое колбы охлаждают, доводят до метки метанолом и отстаивают. Затем отбирают 2 мл полученного раствора, добавляют к нему 0,4 мл раствора метилстеарата (внутренний стандарт) в хлороформе с концентрацией метилстеарата 1 мг/мл и упаривают досуха.

К упаренному экстракту добавляют 1 мл пиридина, растворяя сухой остаток, 0,6 мл гексаметилдисилазана и 0,2 мл триметилхлорсилана. Полученную смесь выдерживают при температуре 50 град. С в течение 20 мин.

Условия проведения хроматографического анализа:

- колонка капиллярная кварцевая длиной 12-25 м и диаметром 0,2 мм, заполненная метилсиликоновой фазой (типа OV-101);

- температура испарителя 280 град. С;

- температура детектора 290 град. С;

- температура колонки изменяется от 200 до 280 град. С со скоростью 10 град. С/мин.;

- газ-носитель - гелий (азот);

- детектор пламенно-ионизационный.

Перед количественным определением готовят калибровочную смесь, используя стандартные образцы метилстеарата, морфина и кодеина. При отсутствии стандартных образцов используют относительный массовый коэффициент - K.

K морфина к метилстеарату равен 0,94, кодеина - 0,96 (табл. 2). В этом случае расчет ведут по формуле:

 

                           S  x m

                            x    ст

                       X = -------- х К х 100%;                         (1)

                           S   x m

                            ст    п

 

                                   K

                                    оп

                               K = ----,                                (2)

                                   K

                                    вс

 

    где:

    X - количество определяемого вещества, % мас.;

    S  - площадь пика определяемого вещества, усл. ед.;

     x

    S   - площадь пика внутреннего стандарта, усл. ед.;

     ст

    m  - масса пробы исследуемого вещества, содержащаяся в 2 мл отобранного

     п

раствора, г;

    m   - масса внесенного в пробу внутреннего стандарта, г;

     ст

    К -  относительный   массовый  коэффициент   определяемого  вещества  к

внутреннему стандарту (в данном случае к метилстеарату);

    К   -   абсолютный   массовый   коэффициент   определяемого   вещества,

     оп

ед. массы/ед. площади;

    К   - абсолютный массовый коэффициент внутреннего стандарта.

     вс

Абсолютный массовый коэффициент рассчитывают делением концентрации какого-либо вещества в растворе на площадь пика этого вещества на хроматограмме.

При использовании компьютерных программ типа HP Chem (рис. 1) вводят относительный массовый коэффициент - К напрямую в калибровочную таблицу; при этом следует учитывать, что К метилстеарата равен 1.

 

Рис. 1. Калибровочная таблица

компьютерной программы HP Chem

 

Рисунок не приводится.

 

Исследование метадона, пентазоцина и метаквалона

 

При исследовании порошкообразных метадона, пентазоцина или метаквалона 2-5 мг исследуемого вещества заливают 1 мл дистиллированной воды, нагревают смесь до 60-70 град. С и после охлаждения добавляют к смеси 1 мл раствора метилстеарата (внутренний стандарт) в хлороформе (концентрация метилстеарата 1-2 мг/мл), каплю 25% водного раствора аммиака (диэтиламина, триэтиламина). Смесь встряхивают и после расслаивания отбирают хлороформный слой, стараясь не захватить водный. После этого проводят экстракцию еще двумя порциями чистого хлороформа, каждый раз отбирая хлороформный слой. Хлороформные экстракты объединяют и осторожно упаривают досуха (лучше всего в токе инертного газа или на роторном испарителе). К сухим остаткам добавляют 0,5-1 мл хлороформа, смывая вещество со стенок сосуда. Полученный раствор исследуют методом газовой хроматографии. Концентрацию добавляемого раствора метилстеарата подбирают таким образом, чтобы высота пиков внутреннего стандарта и исследуемого вещества на хроматограмме была примерно одинакова.

При исследовании растворов метадона, метаквалона или пентазоцина к 1 мл исследуемого раствора добавляют 1 мл раствора метилстеарата в хлороформе (концентрация метилстеарата 1-2 мг/мл), каплю 25% водного раствора аммиака и проводят экстракцию, как указано выше. Лекарственное средство "Фортрал", содержащее пентазоцин, перед исследованием разбавляют дистиллированной водой в 10 раз и полученный раствор исследуют, как указано выше.

Условия проведения газохроматографического анализа:

- колонка кварцевая капиллярная длиной 12-25 м и диаметром 0,2 мм, заполненная диметилсиликоновой стационарной фазой (типа OV-101);

- температура испарителя 280 град. С;

- температура детектора 290 град. С;

- температура колонки меняется от 200 до 280 град. С со скоростью 10 град. С/мин.;

- газ-носитель - гелий (азот);

- детектор пламенно-ионизационный.

Ввод пробы осуществляют с делением потока.

Перед количественным определением готовят калибровочную смесь с применением стандартных образцов метилстеарата, метадона, пентазоцина или метаквалона. При отсутствии стандартных образцов используют относительный массовый коэффициент - К.

К метадона к метилстеарату составляет 1,2; пентазоцина - 1,28; метаквалона - 1,06 (табл. 2). В этом случае расчет ведут по формуле (1) либо с помощью компьютерных программ типа HP Chem вводят К напрямую в калибровочную таблицу (при этом К метилстеарата равен 1).

Вместо метилстеарата в качестве внутреннего стандарта можно использовать другие соединения, например насыщенные углеводороды.

 

Исследование фенциклидина

 

При исследовании порошкообразного фенциклидина 2-5 мг вещества заливают 1 мл дистиллированной воды, нагревают до 60-70 град. С и после охлаждения добавляют 1 мл раствора метилстеарата в хлороформе (концентрация метилстеарата 1-2 мг/мл), каплю 25% водного раствора аммиака (диэтиламина, триэтиламина). Смесь осторожно встряхивают и после отстаивания отбирают хлороформный слой, стараясь не захватить водный. После этого проводят экстракцию еще двумя порциями чистого хлороформа, отбирая каждый раз хлороформный слой. Хлороформные экстракты объединяют и осторожно упаривают досуха (лучше всего в токе инертного газа или на роторном испарителе). Затем к сухим остаткам добавляют 0,5-1 мл хлороформа, смывая вещество со стенок сосуда. Полученный раствор исследуют методом газовой хроматографии. Концентрацию добавляемого раствора стандарта подбирают таким образом, чтобы высота пиков внутреннего стандарта и исследуемого вещества на хроматограмме была примерно одинакова.

При исследовании растворов фенциклидина к 1 мл водного раствора прибавляют 1 каплю 25% водного раствора аммиака, 1 мл раствора метилстеарата в хлороформе (концентрация метилстеарата 1-2 мг/мл) и после встряхивания и отстаивания отбирают хлороформный слой, стараясь не захватить водный. После этого проводят экстракцию еще двумя порциями чистого хлороформа. Объединенные хлороформные экстракты упаривают досуха. К упаренным сухим остаткам прибавляют 1 мл хлороформа, осторожно смывая хлороформом сухой остаток со стенок сосуда, и исследуют его методом газовой хроматографии.

При исследовании фрагмента бумажки, пропитанной фенциклидином, его разрезают на мелкие части, заливают раствором метилстеарата в хлороформе (концентрация метилстеарата 1 мг/мл), доводят до кипения, отбирают как можно большее количество хлороформа, после чего проводят еще две экстракции чистым хлороформом, отбирая каждый раз хлороформный слой. Хлороформные экстракты объединяют и упаривают досуха. К полученным упаренным экстрактам добавляют 1 мл хлороформа, осторожно смывая со стенок и дна сосуда упаренный экстракт. Полученный раствор хроматографируют.

Растительные объекты с нанесенным фенциклидином измельчают в ступке, затем 0,1 г вещества заливают 1 мл раствора метилстеарата в хлороформе (концентрация метилстеарата 1 мг/мл), добавляют одну каплю триэтиламина (диэтиламина) и доводят до кипения. После этого экстракт охлаждают и хроматографируют.

Условия проведения хроматографического анализа:

- колонка кварцевая капиллярная длиной 12-25 м и диаметром 0,2 мм, заполненная диметилсиликоновой стационарной фазой (типа OV-101);

- температура испарителя 280 град. С;

- температура детектора 290 град. С;

- температура колонки меняется от 200 до 280 град. С со скоростью 10 град. С/мин.;

- время выдержки при конечной температуре - 15 мин.;

- газ-носитель - гелий (азот);

- детектор пламенно-ионизационный.

Перед количественным определением готовят калибровочную смесь с применением стандартных образцов метилстеарата и фенциклидина. При отсутствии стандартного образца фенциклидина используют относительный массовый коэффициент - К.

К фенциклидина к метилстеарату составляет 0,82. В этом случае расчет ведут по формуле (1) либо с помощью компьютерных программ типа HP Chem вводят К напрямую в калибровочную таблицу (при этом К метилстеарата равен 1).

Вместо метилстеарата в качестве внутреннего стандарта можно использовать другие соединения, например насыщенные углеводороды.

 

Исследование бупренорфина

 

Исследование бупренорфина проводят, получая его ацетильные или силилильные производные, так как из-за наличия полярных функциональных групп он адсорбируется в газохроматографической системе, что приводит к нелинейной зависимости между количественным содержанием бупренорфина в образце и площадью хроматографического пика.

При исследовании растворов бупренорфина к 2 мл водного раствора прибавляют 1 каплю 25% водного раствора аммиака, 1 мл раствора папаверина в хлороформе (концентрация папаверина около 0,3 мг/мл) и после встряхивания и отстаивания отбирают хлороформный слой, стараясь не захватить водный. После этого проводят экстракцию еще двумя порциями чистого хлороформа. Объединенные хлороформные экстракты упаривают досуха.

Далее исследование проводят либо силилируя полученный экстракт, либо ацетилируя его.

В первом случае к упаренному экстракту добавляют 0,5 мл пиридина, осторожно смывая им осадок со стенок сосуда. Затем к полученному раствору последовательно добавляют 0,3 мл гексаметилдисилазана и 0,1 мл триметилхлорсилана, каждый раз перемешивая смесь. После добавки последнего компонента смесь выдерживают при температуре 50 град. С в течение 20 мин. и исследуют методом газовой хроматографии.

Во втором случае к упаренному экстракту добавляют 0,7 мл уксусного ангидрида и выдерживают при температуре 70 град. С в течение 30 мин., после чего полученную смесь хроматографируют.

При исследовании бупренорфина в виде таблетки ее растирают в ступке, растворяют в 1 мл воды, заливают 0,5 мл раствора папаверина в хлороформе (концентрация папаверина около 0,3 мг/мл), добавляют каплю водного 25% раствора аммиака; после встряхивания и отстаивания отбирают как можно больше хлороформа, после чего проводят еще две экстракции чистым хлороформом. Объединенные хлороформные экстракты упаривают досуха. Далее исследование проводят, как и для растворов.

Условия проведения хроматографического анализа:

- колонка кварцевая капиллярная длиной 12-25 м и диаметром 0,2 мм, заполненная диметилсиликоновой стационарной фазой (типа OV-101);

- температура испарителя 280 град. С;

- температура детектора 290 град. С;

- температура колонки меняется от 200 до 280 град. С со скоростью 10 град. С/мин.;

- время выдержки при конечной температуре - 10-25 мин.;

- газ-носитель - гелий (азот);

- детектор пламенно-ионизационный.

Перед количественным определением готовят калибровочную смесь с применением стандартных образцов папаверина и бупренорфина. При отсутствии стандартного образца бупренорфина используют относительный массовый коэффициент - К.

К бупренорфина к папаверину при ацетилировании составляет 0,51; при силилировании - 2,63. В этом случае расчет ведут по формуле (1) либо с помощью компьютерных программ типа HP Chem вводят К напрямую в калибровочную таблицу (при этом К папаверина равен 1).

Вместо папаверина в качестве внутреннего стандарта можно использовать другие соединения, например насыщенные углеводороды.

 

Исследование 3-метилфентанила

 

До настоящего времени 3-метилфентанил поступал на нелегальный рынок в виде прозрачного, бесцветного раствора, готового к употреблению. При этом 3-метилфентанил существует в виде двух пространственных изомеров (цис- и транс-), а концентрация 3-метилфентанила в растворе очень мала из-за его высокой активности. Поэтому перед исследованием проводят пробоподготовку, как указано ниже.

В качестве стандарта используют диоктилфталат. Относительный массовый коэффициент - К каждого изомера 3-метилфентанила к диоктилфталату составляет 1,2. В ходе определения к точно отмеренному количеству исследуемой жидкости (примерно к 2,0-2,5 мл) добавляют 1 мл раствора диоктилфталата в гексане (пентане) с известной концентрацией (использование раствора стандарта в гексане предпочтительнее, поскольку температура его кипения выше, чем у пентана, и концентрация раствора не будет меняться при хранении), каплю 1 N раствора NaOH и интенсивно встряхивают. После расслаивания смеси органический слой (примерно 0,8 мл) отбирают и упаривают досуха. После этого проводят экстракцию еще двумя порциями чистого пентана по 2 мл, упаривая каждую порцию в той же емкости, что и первую (со стандартом). К упаренному экстракту добавляют 4-6 капель хлороформа, тщательно смывая им экстракт со стенок и дна сосуда. Полученный раствор хроматографируют в указанных ниже условиях. Транс-изомер в этих условиях имеет индекс удерживания 2775, цис-изомер - 2804. После определения содержание цис- и транс-изомера суммируют. Практика показывает, что концентрация стандарта - диоктилфталата в гексане (пентане) должна составлять примерно 0,01-0,02 мг/мл.

Условия проведения газохроматографического анализа:

- колонка кварцевая капиллярная длиной 10-25 м и диаметром 0,2 мм, заполненная метилсиликоновой фазой (типа OV-101);

- температура испарителя 275 град. С;

- температура детектора 290 град. С;

- температура колонки изменяется от 200 до 280 град. С со скоростью 10 град. С/мин.;

- время выдержки колонки при конечной температуре - 10 мин.;

- газ-носитель - азот;

- детектор пламенно-ионизационный.

При недостаточной чувствительности прибора используют систему Splitless.

Перед количественным определением готовят калибровочную смесь с применением стандартных образцов диоктилфталата и 3-метилфентанила. При отсутствии стандартного образца 3-метилфентанила используют относительный массовый коэффициент - К.

К 3-метилфентанила к диоктилфталату составляет 1,2. В этом случае расчет ведут по формуле (1) либо с помощью компьютерных программ типа HP Chem вводят К напрямую в калибровочную таблицу (при этом К диоктилфталата равен 1).

Вместо диоктилфталата в качестве стандарта можно использовать другие соединения, например насыщенные углеводороды.

 

Таблица 2

 

ОТНОСИТЕЛЬНЫЙ МАССОВЫЙ КОЭФФИЦИЕНТ (К)

НАРКОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ

 

┌─────────────────────────┬──────────────┬───────────────────────┐

         Вещество           Стандарт   │ Относительный массовый│

                                            коэффициент - К  

├─────────────────────────┼──────────────┼───────────────────────┤

│Морфин                   │Метилстеарат           0,94         

│Кодеин                   │"                      0,96         

│Метадон                  │"                      1,20         

│Бупренорфин:                                                 

│силилирование            │Папаверин              2,63         

│ацетилирование           │"                      0,51         

│Пентазоцин               │Метилстеарат           1,28         

│3-метилфентанил:                                             

│цис-изомер               │Диоктилфталат │         1,2          

│транс-изомер             │"                      1,2          

│Метаквалон               │Метилстеарат           1,06         

│Фенциклидин              │"                      0,82          

└─────────────────────────┴──────────────┴───────────────────────┘

 

Исследование методом жидкостной хроматографии

 

Оптимизация условий анализа

 

Анализ проводят методом обращенно-фазной жидкостной хроматографии, например, с использованием аналитической колонки типа КАХ-4 размером 80 x 2 мм с обращенно-фазным сорбентом Separon С18 (НПО "Научприбор", г. Орел).

В качестве подвижной фазы применяют смесь фосфатного буфера с ацетонитрилом в объемном соотношении 50:50 (соотношение для ЛСД см. ниже). При оптимизации состава подвижной фазы нет необходимости добиваться полного хроматографического разделения всех возможных компонентов исследуемых образцов, часто представляющих собой смеси различных по химической природе веществ; главная цель хроматографического разделения - выделение пригодного для количественного обсчета хроматографического пика наркотически активного компонента при минимальном времени проведения анализа.

 

Приготовление подвижной фазы

 

Для приготовления фосфатного буфера в 1 л дистиллированной воды растворяют 12,0 г 82% ортофосфорной кислоты, 3,0 г едкого калия и 3,0 г диэтиламина. Буфер указанного состава должен иметь значение рН, равное 3. В случае отклонения рН буфера от указанной величины следует провести корректировку, добавляя водный раствор щелочи или кислоту. Значение рН буфера предварительно определяют по универсальной индикаторной бумаге. Для более точного определения следует использовать рН-метр любого типа.

Для приготовления подвижной фазы фосфатный буфер смешивают с ацетонитрилом в указанном соотношении и тщательно перемешивают смесь с помощью магнитной мешалки. Подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр пористостью не более 0,5 мкм и дегазируют, помещая в ультразвуковую ванну на 20 мин., или продувают гелием в течение 20 мин. (дегазация гелием более эффективна).

Регистрацию сигнала наркотически активного компонента осуществляют, как правило, на длине волны, соответствующей одному из максимумов поглощения УФ-спектра данного соединения (в кислой среде), - селективной длине волны.

Объем вводимой пробы во всех случаях - 10 мкл.

 

Определение хроматографических параметров исследуемых веществ

 

Хроматографические параметры исследуемых веществ для выбранных условий анализа определяют путем хроматографирования растворов стандартных образцов метаквалона, метадона, бупренорфина, фенциклидина, 3-метилфентанила, пентазоцина. Время удерживания и коэффициенты емкости указаны в табл. 3.

Хроматограммы исследуемых веществ и их УФ-спектры приведены в приложении (рис. 1-6) (не приводится).

 

Таблица 3

 

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ ИССЛЕДУЕМЫХ ВЕЩЕСТВ

 

┌───────────────┬─────────────────┬──────────────────┬───────────┐

   Вещество    │Абсолютное время │Исправленное время│Коэффициент│

               │удерживания, мин.│удерживания, мин. │  емкости 

├───────────────┼─────────────────┼──────────────────┼───────────┤

│Метаквалон           5,38              3,77          2,34   

│Метадон              3,55              1,94          1,20   

│Бупренорфин          3,40              1,79          1,11   

│Фенциклидин          3,44              1,83          1,13   

│3-метилфентанил│      3,68              2,07          1,28   

│Пентазоцин           2,72              1,11          0,69   

└───────────────┴─────────────────┴──────────────────┴───────────┘

 

Количественное определение исследуемых веществ

 

Калибровка детектора

 

Для количественного определения исследуемых веществ калибруют УФ-детектор хроматографа, используя метод абсолютной калибровки (с применением калибровочных растворов известной концентрации).

Дня приготовления калибровочных растворов стандартные образцы веществ растворяют в подвижной фазе. Первоначальная концентрация исходных растворов должна составлять 1,00 мг/мл. Далее исходные растворы разбавляют подвижной фазой для получения растворов с концентрациями 0,50; 0,25; 0,125; 0,0625; 0,0312 и 0,0156 мг/мл. Приготовленные растворы хроматографируют при неизменных условиях. По результатам анализа строят калибровочные графики, определяющие зависимость площади хроматографического пика вещества от его концентраций в растворе в диапазонах, указанных в табл. 4. Для исследуемых соединений калибровочные графики имеют линейную зависимость.

 

Таблица 4

 

ДИАПАЗОН ЛИНЕЙНОЙ ЗАВИСИМОСТИ ИССЛЕДУЕМЫХ ВЕЩЕСТВ

 

┌───────────────────────────┬───────────────────┬────────────────┐

         Вещество            Длина волны при      Диапазон   

                           │детектировании, нм │  концентраций, │

                                                    мг/мл    

├───────────────────────────┼───────────────────┼────────────────┤

│Метадон, фенциклидин               210        │0,0156-0,5000  

│Метаквалон                         234        │0,0156-1,0000  

│Бупренорфин                        286        │0,0156-0,5000  

│Пентазоцин                         276        │0,0156-0,5000  

│3-метилфентанил                    210        │0,0125-0,1000  

│ЛСД                                304        │0,0125-0,1000  

└───────────────────────────┴───────────────────┴────────────────┘

 

    Предел   обнаружения  исследуемых   веществ   для   указанных   условий

                                                                -7

хроматографирования составляет величину не менее  (1,0 - 1,5) 10   г,  т.е.

при объеме вводимой пробы 10 мкл вещество может быть обнаружено  в растворе

с  концентрацией  не  менее  0,010-0,015 мг/мл.   В  данном  случае  предел

обнаружения определяют  по величине  достоверно регистрируемого  детектором

минимального аналитического сигнала  (высоте пика) индивидуального вещества

на селективной длине  волны.  За минимальную высоту пика  принимают сигнал,

в 5 раз превышающий уровень флуктуационных шумов, регистрируемых детектором

на данной длине волны.

    Если  для  приготовления  калибровочных растворов используют соединения

в форме хлористо-водородных  или других солей,  в расчеты необходимо внести

                          1

поправочный коэффициент (К ),  позволяющий определить концентрацию вещества

в пересчете на основание:

 

                                М

                            1    основания

                           К  = ----------,                             (3)

                                  М

                                   соли

 

    где:

    М          - молекулярная масса вещества в форме основания;

     основания

    М     - молекулярная масса вещества в форме соли.

     соли

    Калибровки  следует периодически проверять,  хроматографируя растворы с

известной концентрацией вещества.

 

Расчет количественного содержания

 

    При  количественном  определении  веществ  в  виде  порошков, таблеток,

растительных веществ  с нанесенным  наркотическим средством  отбирают пробу

вещества,  измельчают ее в ступке  и проводят экстракцию  пробы элюентом  в

течение 30 мин.  в ультразвуковой ванне либо  при интенсивном встряхивании.

Условия проведения  экстракции  и  соотношение  экстрагент - экстрагируемое

вещество подобраны  таким  образом,  что экстракция  наркотически активного

компонента происходит практически полностью. Полученные экстракты фильтруют

через  мембранный  фильтр,   дегазируют   и  хроматографируют   в указанных

условиях.   После   идентификации   наркотически   активного  компонента  и

определения площади его хроматографического пика  по калибровочным графикам

рассчитывают его концентрацию в экстракте (С , мг/мл).

                                            э

    Количественное содержание наркотического средства  в пробе исследуемого

вещества (X, % мас.) рассчитывают по формуле:

 

                              С  х V

                               э    э

                          X = ------- х 100%,                           (4)

                                m

                                 п

 

    где:

    С    -   концентрация  наркотического  средства  в экстракте, найденная

     э

по калибровочному графику, мг/мл;

    V  - объем экстрагента, мл;

     э

    m  - масса пробы, мг.

     п

    При  количественном  определении  наркотических  средств  в  объектах в

виде жидкостей  отбирают пробу,  которую  в зависимости  от предполагаемого

содержания в ней наркотического средства исследуют в неизмененном виде либо

разбавляют  подвижной  фазой   в  точно  известное  количество  раз.  Пробу

фильтруют  через  мембранный  фильтр,   дегазируют   и  хроматографируют  в

указанных условиях  После идентификации  наркотически  активного компонента

и  определения  площади   его  хроматографического  пика  по  калибровочным

графикам устанавливают   концентрацию   наркотического   средства  в  пробе

(С , мг/мл).

  п

    Количественное содержание наркотического средства  в объеме исследуемой

 жидкости (X, мг) рассчитывают по формуле:

 

                             X = С  x V  x r ,                          (5)

                                  п    ж    п

 

    где:

    С  -  концентрация  наркотического  средства   в  пробе,   найденная по

     п

калибровочному графику, мг/мл;

    V  - объем исследуемой жидкости, мл;

     ж

    r  - число, равное кратности разбавления пробы.

     п

 

Хроматографическое исследование модельных смесей и экспертных образцов

 

Поскольку экспертные образцы наркотических средств, как правило, содержат добавки различных веществ, при разработке методики готовили модельные смеси. Модельные смеси наряду с основным компонентом содержали добавки различных веществ, наиболее часто встречающихся в том или ином наркотическом средстве, изымаемом из незаконного оборота. При анализе модельных смесей определяли основные хроматографические параметры разделения их компонентов и снимали УФ-спектры каждого компонента.

Приведенные в приложении хроматограммы (рис. 1-7) были сняты в режиме многоволнового детектирования (при одновременной регистрации сигнала на пяти длинах волн) на жидкостном хроматографе "Милихром-4" (НПО "Научприбор", г. Орел). Управление работой хроматографа, сбор и обработку получаемых данных осуществляли с помощью программы автоматизации хроматографических анализов "МультиХром-Спектр" (АО "АМПЕРСЕНД", г. Москва).

 

Исследование метаквалона

 

Метаквалон в виде таблетки или порошка перед исследованием растирают в ступке и гомогенизируют перемешиванием. Затем проводят экстракцию подвижной фазой при точном соотношении 1 мг вещества в 1 мл подвижной фазы. Полученные экстракты хроматографируют в указанных выше условиях.

Наиболее распространенными добавками в образцах метаквалона являются: димедрол, героин (и все характерные добавки к героину - фенобарбитал, кофеин, парацетамол, папаверин и т.д.), кокаин и хинин. Хроматограммы модельных смесей метаквалона с некоторыми из перечисленных добавок приведены на рис. 2-4. Все добавки элюируются значительно раньше метаквалона и не затрудняют его количественное определение.

 

Рис. 2. Хроматограмма модельной смеси:

1 - диацетилморфин; 2 - димедрол; 3 - метаквалон

 

Рис. 3. Хроматограмма модельной смеси:

1 - хинин; 2 - кокаин; 3 - метаквалон

 

Рис. 4. Хроматограмма модельной смеси:

1 - кофеин; 2 - диацетилморфин; 3 - фенобарбитал;

4 - димедрол; 5 - метаквалон

 

Рисунки не приводятся.

 

Исследование метадона

 

Метадон в виде таблеток или порошка перед исследованием растирают в ступке и гомогенизируют перемешиванием. Затем проводят экстракцию подвижной фазой при точном соотношении 0,5 мг вещества в 1 мл подвижной фазы. Полученные экстракты хроматографируют в указанных выше условиях.

Метадон часто бывает представлен в смеси с димедролом, новокаином или новокаинамидом.

Хроматограмма модельной смеси метадона с названными добавками приведена на рис. 5.

 

Рис. 5. Хроматограмма модельной смеси:

1 - новокаинамид; 2 - новокаин; 3 - димедрол; 4 - метадон

 

Рисунок не приводится.

 

Концентрацию примесей новокаина и новокаинамида по отношению к метадону выдерживали в пределах величины, экспериментально установленной при исследовании реальных экспертных образцов. Как видно из хроматограммы, все добавки элюируются значительно раньше метадона и не затрудняют его количественное определение.

 

Исследование 3-метилфентанила

 

3-метилфентанил поступает на исследование в виде водных растворов. В растворе кроме самого 3-метилфентанила в значительных количествах присутствует новокаин или новокаинамид. Такие жидкости исследуют в неизмененном виде, не разбавляя их подвижной фазой.

Хроматограмма модельной смеси 3-метилфентанила (смесь цис- и транс-изомеров в равных количествах), фентанила, новокаинамида и новокаина приведена на рис. 6.

 

Рис. 6. Хроматограмма модельной смеси:

1 - новокаинамид; 2 - новокаин; 3 - фентанил;

4 - 3-метилфентанил (смесь цис- и транс-изомеров)

 

Рисунок не приводится.

 

Концентрацию новокаина и новокаинамида по отношению к 3-метилфентанилу выдерживали в пределах величины, экспериментально установленной при исследовании реальных экспертных образцов. Как видно из хроматограммы, новокаин и новокаинамид элюируются значительно раньше 3-метилфентанила и не затрудняют его количественное определение (степень разделения фентанила и 3-метилфентанила является достаточной для количественного определения последнего). Для указанных условий хроматографирования разделение цис- и транс-изомеров 3-метилфентанила не представляется возможным.

 

Исследование фенциклидина

 

Фенциклидин встречается в виде кристаллического вещества, а также смеси с различными растительными субстратами, из которых наиболее распространенными являются табак, марихуана, мята, петрушка, или нанесенным на бумагу и салфетки.

При исследовании порошкообразных веществ их растирают в ступке, гомогенизируют перемешиванием, заливают подвижной фазой при точном соотношении 0,5 мг вещества в 1 мл подвижной фазы и экстрагируют в течение 30 мин. в ультразвуковой ванне или при интенсивном встряхивании. При исследовании пропитанной фенциклидином бумаги ее фрагмент разрезают на кусочки размером примерно 2 x 2 мм, заливают 10 мл подвижной фазы и проводят экстракцию вещества в течение 60 мин. в ультразвуковой ванне.

Растительные вещества (табак, марихуана, петрушка), пропитанные фенциклидином, измельчают в ступке, затем отбирают точные навески массой 100 мг, заливают 10 мл подвижной фазы и проводят экстракцию вещества в течение 60 мин. в ультразвуковой ванне. Полученные экстракты порошков, бумаги и растительных веществ хроматографируют в указанных выше условиях.

Хроматограммы экстрактов модельных смесей фенциклидина с табаком и марихуаной приведены на рис. 7, 8.

 

Рис. 7. Хроматограмма экстракта

модельной смеси фенциклидина с табаком

(содержание фенциклидина в смеси - 1,0% мас.):

1 - фенциклидин

 

Рис. 8. Хроматограмма экстракта

модельной смеси фенциклидина с марихуаной

(содержание фенциклидина в смеси - 10% мас.):

1 - фенциклидин

 

Рисунки не приводятся.

 

Исследование бупренорфина

 

Водные растворы бупренорфина исследуют в неизмененном виде, не разбавляя подвижной фазой.

Таблетки взвешивают с точностью до 0,1 мг, тщательно измельчают и экстрагируют в ультразвуковой ванне 2,0 мл подвижной фазы.

Хроматограмма лекарственного средства Norphin производства Индии приведена на рис. 9.

 

Рис. 9. Хроматограмма жидкости из ампулы

Norphin (Индия), содержащей бупренорфин

в концентрации 0,299 мг/мл (на основание):

1 - бупренорфин

 

Рисунок не приводится.

 

Исследование пентазоцина

 

Жидкости разбавляют подвижной фазой в 60, 120 и 240 раз, получая при этом растворы с расчетной концентрацией пентазоцина соответственно 0,50; 0,25 и 0,125 мг/мл.

Хроматограмма содержимого ампулы "Фортрал" после разбавления ее подвижной фазой в 60 раз приведена на рис. 10. Концентрация пентазоцина, определенная по калибровочному графику (0,493 мг/мл), практически совпадает с расчетной концентрацией (0,50 мг/мл). Количество пентазоцина в содержимом ампулы "Фортрал", рассчитанное по формуле (4), составляет 29,58 мг.

 

Рис. 10. Хроматограмма содержимого ампулы "Фортрал"

при разбавлении подвижной фазой в 60 раз

 

Рисунок не приводится.

 

Исследование лизергида

 

Лизергид (ЛСД, диэтиламид лизергиновой кислоты), как правило, встречается в виде пропитки бумаги. При исследовании фрагмент бумаги разрезают на кусочки размером примерно 2 x 2 мм, заливают 1,0 мл экстрагента (фосфатный буфер - ацетонитрил в объемном соотношении 70:30) и проводят экстракцию вещества в течение 60 мин. в ультразвуковой ванне (фосфатный буфер готовят так же, как было указано выше). Полученный экстракт декантируют с кусочков бумаги и хроматографируют в указанных выше условиях (в качестве подвижной фазы применяют смесь фосфатного буфера с ацетонитрилом в объемном соотношении 70:30).

Определение содержания лизергида в экстракте проводят методом абсолютной калибровки, используя для построения калибровочного графика растворы лизергида с точно известной концентрацией. Хроматограмма экстракта с бумажки с экспериментально установленным количеством лизергида - 70,5 мкг (концентрация лизергида в 1 мл экстракта - 70,5 мкг/мл) приведена на рис. 11.

 

Рис. 11. Хроматограмма экстракта с бумажки,

содержащей лизергид в количестве 70,5 мкг:

1 - лизергиновая кислота; 2 - ЛСД

 

Рисунок не приводится.

 

Исследование методом УФ-спектроскопии

 

Общее описание метода

 

Метод УФ-спектроскопии является простым и экспрессным методом количественного определения веществ и проводится только после качественного выявления в пробе определяемого вещества одним из идентификационных методов анализа (тонкослойной хроматографией, ИК-спектроскопией, хромато-масс-спектрометрией и др.).

Преимуществами метода УФ-спектроскопии при количественном определении веществ являются:

- высокая точность и воспроизводимость результатов (относительная погрешность измерения не превышает 2-3% отн.);

- исследование водных растворов веществ;

- отсутствие влияния на результаты измерения различных наполнителей, часто встречающихся в смеси с наркотическими средствами (сахаров, крахмала, соды и др.);

- возможность анализировать летучие и нелетучие вещества;

- экспрессность анализа;

- отсутствие необходимости использования дорогостоящих и редких реактивов.

Количественное определение веществ методом УФ-спектроскопии проводят в соответствии с законом Бугера-Ламберта-Бера по предварительно построенной градуировочной кривой, представляющей собой линейную зависимость оптической плотности (А) от концентрации вещества (С). Общая схема количественного анализа, которая может быть использована для широкого круга контролируемых веществ, описана ниже.

Для построения градуировочной кривой готовят стандартный раствор вещества, растворяя точную навеску чистого вещества (обычно гидрохлорида) 10 - 25 мг в 50 мл дистиллированной воды. Из полученного таким образом стандартного раствора готовят путем разбавления не менее трех растворов с концентрацией в интервале от 0,1 до 0,5 мг/мл. Для веществ, которые сильно поглощают в УФ-области (кокаин, морфин, метаквалон, производные амфетамина), исходный раствор разбавляют в 10 раз, т.е. 10,0 мл раствора помещают в колбу на 100 мл и доводят до метки дистиллированной водой. Из полученного раствора также готовят путем разбавления не менее трех растворов с концентрациями в интервале от 0,01 до 0,05 мг/мл. Кроме того, в качестве стандартов можно также использовать любые препараты или смеси с известной концентрацией определяемого вещества (например, растворы из ампул или таблетки с известным содержанием контролируемого вещества).

На следующем этапе проводят измерение оптической плотности приготовленных стандартных растворов, используя кварцевые кюветы с толщиной поглощающего слоя 10 мм. В качестве раствора для сравнения используют "холостой" раствор, которым, как правило, является дистиллированная вода. Измерение оптической плотности анализируемых растворов проводят в максимуме поглощения, который указан в табл. 5. УФ-спектры некоторых наркотических средств приведены в приложении (см. рис. 8-11).

Затем строят градуировочную кривую зависимости оптической плотности в максимуме поглощения (А) от концентрации (С) данного вещества. При построении градуировочной кривой используют либо абсолютную оптическую плотность (от нуля по оси ординат), либо оптическую плотность относительно базовой линии, соединяющей минимумы на спектральной кривой, лежащие рядом с измеряемым максимумом оптической плотности.

 

Таблица 5

 

ОСНОВНЫЕ ПАРАМЕТРЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

НЕКОТОРЫХ НАРКОТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ МЕТОДОМ УФ-СПЕКТРОСКОПИИ

 

┌─────────────────┬────────────────────────┬─────────────────────┐

    Вещество     │Длина волны в максимуме │      Диапазон      

                      поглощения, нм     │ концентраций, мг/мл │

├─────────────────┼────────────────────────┼─────────────────────┤

│Кокаин                     234           │0,01-0,06           

│Пентазоцин                 278           │0,01-0,20           

│Бупренорфин                286           │0,10-0,40           

│Метадон                    295           │0,10-0,60           

│Фенциклидин (РСР)│          262           │0,1-1,5             

│Метаквалон                 227           │0,001-0,015         

└─────────────────┴────────────────────────┴─────────────────────┘

 

    При  определении  содержания  исследуемого  вещества  в  пробе 10-25 мг

исследуемого образца (g) растворяют  в  50  мл  (V ) дистиллированной воды,

                                                  1

подкисленной 2-3 каплями  концентрированной  соляной кислоты.  Для веществ,

которые  сильно  поглощают   в  УФ-области   (кокаин,  морфин,  амфетамины,

метаквалон),  исходный раствор разбавляют  в 10 раз,  т.е. аликвотную часть

исходного раствора, равную 5 мл (V ), помещают в мерную колбу на 50 мл (V )

                                  2                                      3

и доводят до метки дистиллированной водой.  УФ-спектр полученного  раствора

регистрируют  в  тех же  условиях,  что и  УФ-спектры стандартных образцов.

Затем,   определив  значение  оптической  плотности  образца   в  максимуме

поглощения  (А),   находят  концентрацию  вещества     )  в  растворе  по

                                                       гр

градуировочной кривой.

Содержание вещества (Q) рассчитывают по формуле:

 

                            C   х V  х V

                             гр    1    3

                        Q = ------------- х 100%,                       (6)

                               V  х g

                                2

 

    где:

    Q - содержание определяемого вещества, % мас.;

    С     - концентрация вещества  в растворе, найденная  по градуировочной

     гр

кривой, мг/мл;

    V   -  объем  дистиллированной воды,  в котором была растворена навеска

     1

образца, мл;

    V  - объем аликвотной части раствора, мл;

     2

    V  - конечный объем анализируемого раствора, мл;

     3

    g - навеска исследуемого образца, мг.

Количественное определение проводят в трех (или более) параллельных измерениях, из которых рассчитывают средний результат с указанием доверительного интервала при доверительной вероятности 0,95.

Описанный общий подход к количественному исследованию методом УФ-спектроскопии можно применять к любым контролируемым веществам при наличии стандартных образцов и при отсутствии мешающих определению посторонних компонентов. Как правило, не будет мешать определению данного вещества любой компонент, если разница между длинами волн в максимумах поглощения этих веществ составляет не менее 20 нм.

 

Исследование бупренорфина

 

При поступлении бупренорфина в виде растворов в ампулах его количественное исследование проводят с использованием цветной реакции. Минимальная определяемая концентрация бупренорфина в растворе - 0,1 мг/мл. В качестве стандартного раствора используют водный раствор бупренорфина гидрохлорида с концентрацией 0,3 мг/мл, который готовят растворением навески 15,0 мг вещества в 50,0 мл воды. Далее берут три колбы: в одну из них переносят 1,0 мл стандартного раствора, в другую - 1,0 мл дистиллированной воды ("холостой" раствор), а в третью - 1,0 мл испытуемого раствора из ампулы. В каждую колбу добавляют по 0,6 мл 5% раствора соляной кислоты и по 0,2 мл 5% раствора нитрита натрия, встряхивают и оставляют на 15 мин. Затем разбавляют до 5,0 мл водным раствором аммиака, приготовленным смешиванием равных объемов концентрированного раствора аммиака и дистиллированной воды, встряхивают раствор и через 15 мин. сравнивают оптическую плотность стандартного и анализируемого растворов, измеренную относительно "холостого" раствора. Измерения проводят при длине волны 460 нм в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм на любом спектрофотометре для видимой и ультрафиолетовой областей.

Концентрацию бупренорфина основания в растворе рассчитывают по формуле:

 

                               А

                                ан

                         С   = ---- x С   x 0,928,                      (7)

                          ан   А       ст

                                ст

 

    где:

    С  ,   С    - концентрация  анализируемого  и  стандартного  растворов,

     ан     ст

мг/мл;

    А  , A   - оптическая плотность анализируемого и стандартного растворов

     ан   ст

относительно "холостого" раствора (безразмерные величины);

    0,928  -  коэффициент  (для  пересчета  из  гидрохлорида  в основание).

В том случае, если образец, содержащий бупренорфин, представляет собой таблетку или порошок, навеску образца 0,5-1,0 мг растворяют в 1,5 мл дистиллированной воды, подкисленной 1-2 каплями концентрированной соляной кислоты, затем полученный раствор подщелачивают 1-2 каплями концентрированного раствора аммиака, добавляют 1,5 мл хлороформа, тщательно перемешивают и через 15 мин. осторожно отбирают из нижнего хлороформного слоя 1,0 мл раствора, который помещают в склянку с коническим основанием и упаривают в термостате при температуре 60-70 град. С. Затем к исследуемому раствору добавляют 1,0 мл хлороформа, тщательно перемешивают и через 15 мин. отбирают из нижнего хлороформного слоя 1,0 мл раствора, который помещают в ту же склянку с коническим основанием и упаривают. Для полноты извлечения бупренорфина операцию экстрагирования проводят еще раз, после чего проводят упаривание хлороформного раствора, содержащего извлеченный бупренорфин, досуха при температуре 60-70 град. С. Аналогично проводят трехкратную экстракцию 1,5 мл стандартного водного раствора бупренорфина гидрохлорида с концентрацией 0,3 мг/мл и последующее упаривание хлороформного экстракта досуха. Стандартный раствор готовят растворением навески 15,0 мг бупренорфина гидрохлорида в 50,0 мл воды.

    После  проведения  экстракции  в  склянки  с  упаренными  хлороформными

экстрактами стандартного  и анализируемого  растворов  добавляют  по 0,1 мл

(V ) метанола,  затем отбирают  микрошприцем  по 0,05  мл  (V ) метанольных

  1                                                          2

растворов  из каждой склянки  и наносят   (в виде пятен)  на предварительно

очищенную   в  метаноле  хроматографическую  пластину   "Сорбфил"  ПСТХ-УФ,

используя   нагревательный  столик   для   ускорения   процесса  нанесения.

Хроматографирование пластины проводят  в системе толуол-ацетон-этанол - 25%

водный раствор аммиака  (45:45:7:3)  или толуол-этанол - 25% водный раствор

аммиака (150:25:1).

После хроматографирования пластину высушивают при температуре 60-70 град. С в течение 10-15 мин. и осматривают в лучах УФ-лампы (длина волны 254 нм), отмечая расположение хроматографических зон бупренорфина на пластине. Затем вырезают из пластины три равных квадрата размером 1 кв. см, которые содержат:

зону бупренорфина из стандартного раствора;

зону бупренорфина из анализируемого раствора;

фрагмент пластины без каких-либо хроматографических зон ("холостая" проба).

    Далее каждый  квадрат помещают в бюкс  и заливают  одинаковыми объемами

смеси  метанол - 5%  водный  раствор  соляной  кислоты  (V  =  1 - 4 мл,  в

                                                          3

зависимости  от объема используемых далее кварцевых  кювет).  Через 10 мин.

проводят  фотометрирование  растворов,  регистрируя  оптическую   плотность

стандартного   и   анализируемого   растворов   относительно   "холостого".

Измерение проводят при длине  волны 286  нм  в кварцевых кюветах с толщиной

поглощающего   слоя  10  мм   на  любом  спектрофотометре   для  видимой  и

ультрафиолетовой областей.

    Содержание бупренорфина в образце вычисляют по формуле:

 

                      А                        V

                       ан                       1

                      --- х С   х 0,928 х V  х --

                      А      ст            3   V

                       ст                       2

                  Q = --------------------------- х 100%,               (8)

                                    g

 

    где:

    Q - содержание определяемого вещества, % мас.;

    С  ,   С    -  концентрация  анализируемого  и  стандартного  растворов

     ан     ст

относительно "холостого" раствора, мг/мл;

    А  ,  А   -  оптическая   плотность   анализируемого   и   стандартного

     ан    ст

растворов;

    0,928   -  коэффициент  (для пересчета  из гидрохлорида  в  основание);

    g - навеска исследуемого вещества, мг;

    V , V , V  - соответствующие объемы, мл.

     1   2   3

 

Исследование метадона

 

Метадон поступает на исследование как в виде чистого вещества, так и в смеси с различными наполнителями и добавками, такими как сахар, димедрол, новокаин, новокаинамид и дименгидринат (противорвотное лекарственное средство - комплексная соль димедрола и хлортеофиллина).

Наличие сахаров и дименгидрината в смеси не мешает определению метадона методом УФ-спектроскопии. Димедрол и новокаинамид в кислой среде (рН = 0 - 1) также не влияют на количественное определение метадона данным методом. При наличии новокаина можно проводить определение в тех случаях, если оптическая плотность при длине волны 280 нм (пик, характерный для новокаина) превышает оптическую плотность при длине волны 295 нм (пик, характерный для метадона) не более чем на 0,1 ед. оптической плотности.

Количественное определение метадона методом УФ-спектроскопии проводят по методике, описанной выше, с использованием градуировочной кривой. Для построения калибровочной кривой готовят стандартный раствор метадона гидрохлорида, растворяя точную навеску чистого вещества 20-30 мг в 50 мл дистиллированной воды с добавлением 0,5 мл концентрированной соляной кислоты. Из полученного таким образом стандартного раствора с рН = 0 - 1 готовят путем разбавления не менее трех растворов с концентрацией в интервале от 0,1 до 0,6 мг/мл. Фотометрирование растворов проводят в кварцевых кюветах толщиной 10 мм относительно дистиллированной воды, оптическую плотность вычисляют по разности значений оптических плотностей при длине волны 295 нм (максимум поглощения) и 300 нм (минимум поглощения). При построении калибровочной кривой по оси абсцисс откладывают значение концентрации (С), а по оси ординат - вычисленную оптическую плотность (А).

    С целью  определения  содержания  метадона  гидрохлорида  в исследуемом

образце навеску 20-30 мг (g) растворяют в 50 мл (V ) дистиллированной воды,

                                                  1

подкисленной  0,5  мл  концентрированной  соляной  кислоты  (рН  =  0 - 1).

УФ-спектр  полученного  раствора регистрируют  в  тех  же  условиях,  что и

УФ-спектры  стандартных  образцов.  Затем,  определив  значение  оптической

плотности  образца,  находят  концентрацию  метадона  гидрохлорида    ) в

                                                                      гр

растворе по калибровочной кривой  и  рассчитывают  содержание  вещества  по

формуле:

 

                               С   х V

                                гр    1

                           Q = -------- х 100%,                         (9)

                                  g

 

    где:

    Q - содержание определяемого вещества, % мас.;

    С     - концентрация вещества в растворе,  найденная  по градуировочной

     гр

кривой;

    V   -  объем  дистиллированной воды,  в которой была растворена навеска

     1

образца, мл;

    g - навеска исследуемого образца, мг.

При исследовании образца метадона, содержащего в качестве добавки значительное количество новокаина, т.е. если оптическая плотность при длине волны 280 нм (пик, характерный для новокаина) превышает оптическую плотность при длине волны 295 нм (пик, характерный для метадона) более чем на 0,1 ед. оптической плотности, при построении калибровочного графика следует использовать первую производную. В этом случае по оси ординат откладывают значение первой производной в точке 295 нм, а по оси абсцисс - значение концентрации растворов. Получать первую производную позволяют программные обеспечения ряда спектрофотометров в видимой и ультрафиолетовой областях спектра, например Lambda (фирмы Perkin-Elmer), HP8452 (фирмы Hewlett Packard) и др. Использование первой производной позволяет определять метадон в смесях, содержащих любое количество новокаина.

 

Исследование пентазоцина

 

Для количественного определения пентазоцина методом УФ-спектроскопии измеряют поглощение подкисленных водных растворов вещества при длине волны 278 нм. Оптическая плотность растворов пентазоцина в диапазоне концентрации от 0,01 до 0,20 мг/мл не превышает 1,5 ед., поэтому такой интервал концентрации наиболее удобно использовать для построения градуировочного графика.

В соответствии с общими принципами определения количества вещества в растворе методом УФ-спектроскопии (см. выше) ход анализа начинают с построения градуировки. Для приготовления стандартного раствора точную навеску пентазоцина гидрохлорида (10-15 мг) растворяют в 50 мл дистиллированной воды, подкисленной 2-3 каплями концентрированной соляной кислоты. В качестве стандарта можно использовать раствор из ампул с маркировкой "Фортрал", содержащий 30 мг/мл пентазоцина гидрохлорида, который необходимо разбавить следующим образом: 0,3 мл раствора из ампулы поместить в колбу на 50 мл, добавить 2-3 капли концентрированной соляной кислоты и довести раствор в колбе до метки дистиллированной водой. Полученный таким образом стандартный раствор будет иметь концентрацию 0,18 мг/мл пентазоцина гидрохлорида.

Далее проводят построение градуировочной кривой зависимости оптической плотности (А) от концентрации (С) вещества. Для этого из исходного стандартного раствора готовят путем разбавления не менее трех растворов с концентрациями в интервале от 0,01 до 0,20 мг/мл. Измерение оптической плотности приготовленных стандартных растворов проводят в кварцевых кюветах толщиной 10 мм относительно дистиллированной воды в максимуме поглощения при длине волны 278 нм. При построении градуировочной кривой используют либо абсолютную оптическую плотность (от нуля по оси ординат), либо оптическую плотность относительно базовой линии, соединяющей минимумы на спектральной кривой, лежащие рядом с измеряемым максимумом оптической плотности.

    Для  определения  содержания пентазоцина  в исследуемом образце  в виде

таблетки или порошка навеску образца 10-20 мг (g) растворяют в 100 мл  (V )

                                                                         1

дистиллированной воды, подкисленной 2-3 каплями  концентрированной  соляной

кислоты.  Далее  отбирают  из  раствора,  имеющего  объем  (V ),  ликвотную

                                                             1

часть, равную 0,2-0,3 мл  (V ),  помещают  в колбу на 50 мл (V ), добавляют

                            2                                 3

2-3 капликонцентрированной  соляной  кислоты  и  доводят раствор в колбе до

метки дистиллированной водой. Измерение оптической плотности анализируемого

раствора проводят  в тех же условиях,  что и измерение оптической плотности

стандартных  растворов.  Далее  с  использованием  градуировочного  графика

определяют  концентрацию пентазоцина в пробе (С  ).  Содержание пентазоцина

                                               гр

в  образцерассчитывают по формуле (6).

Если пентазоцин поступил на экспертизу в виде раствора, массу пентазоцина (мг) рассчитывают путем умножения концентрации раствора пентазоцина (мг/мл), найденной по градуировочному графику, на объем раствора, который поступил на исследование.

 

Исследование метаквалона

 

Количественное определение метаквалона методом УФ-спектроскопии проводят путем измерения поглощения подкисленных водных растворов вещества при длине волны 227 нм. Оптическая плотность растворов гидрохлорида метаквалона в диапазоне концентраций от 0,001 до 0,015 мг/мл не превышает 1,5 ед., поэтому данный диапазон концентраций используется для построения градуировочного графика.

Для построения градуировочного графика готовят стандартный раствор метаквалона гидрохлорида, растворяя навеску чистого вещества 10-15 мг в 50 мл дистиллированной воды, подкисленной 2-3 каплями концентрированной соляной кислоты. Затем отбирают 2 мл полученного раствора, помещают в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки дистиллированной водой. Полученный таким образом стандартный раствор имеет концентрацию в пределах 0,008-0,012 мг/мл.

Далее проводят построение градуировочной кривой зависимости оптической плотности (А) от концентрации (С) вещества. Для этого из полученного стандартного раствора готовят путем разбавления не менее трех градуировочных растворов концентрацией от 0,001 до 0,015 мг/мл. Измерение оптической плотности приготовленных растворов проводят в кварцевых кюветах толщиной 10 мм относительно дистиллированной воды в максимуме поглощения при длине волны 227 нм. При построении градуировочной кривой используют либо абсолютную оптическую плотность (от нуля по оси ординат), либо скорректированную оптическую плотность, вычисляемую как разность оптической плотности при длине волны 227 нм и оптической плотности в одном из минимумов поглощения (либо при длине волны 250 или 215 нм).

Следует отметить, что при наличии димедрола в образцах, в которых далее будет проводиться определение метаквалона, при построении градуировочного графика следует использовать скорректированную оптическую плотность относительно минимума поглощения при длине волны 215 нм, так как димедрол поглощает в области длины волны 250 нм.

    Для определения  содержания  метаквалона  в исследуемом  образце в виде

таблетки или порошка навеску образца 10-20 мг (g)  растворяют  в 50 мл (V )

                                                                         1

дистиллированной воды,  подкисленной 2-3 каплями  концентрированной соляной

кислоты.  Затем отбирают 2 мл (V ) полученного раствора,  помещают в мерную

                                2

колбу на 50 мл (V )  и доводят  до метки дистиллированной водой.  Измерение

                 3

оптической  плотности анализируемого  раствора проводят  в тех же условиях,

что  и измерение  оптической плотности  градуировочных  растворов.  Далее с

использованием градуировочного  графика  определяют содержание  метаквалона

гидрохлорида (Q) в исследуемом образце по формуле (6).

 

Исследование фенциклидина

 

Количественное определение фенциклидина методом УФ-спектроскопии проводят путем измерения поглощения подкисленных водных растворов вещества. УФ-спектр фенциклидина имеет максимумы поглощения при длинах волн 258, 262 и 270 нм (см. приложение, рис. 10), но для количественных измерений следует использовать максимум поглощения при длине волны 262 нм, так как при этом достигается наибольшая чувствительность определения. Оптическая плотность растворов гидрохлорида фенциклидина в диапазоне концентраций 0,100-1,500 мг/мл не превышает 1,5 ед., поэтому именно данный диапазон концентраций целесообразно использовать для построения градуировочного графика.

Для построения градуировочного графика готовят стандартный раствор фенциклидина гидрохлорида, растворяя точную навеску чистого вещества 10-15 мг в 10 мл дистиллированной воды, подкисленной 2-3 каплями концентрированной соляной кислоты. Полученный таким образом стандартный раствор будет иметь концентрацию в пределах 1,0-1,5 мг/мл.

Для построения градуировочной кривой из полученного стандартного раствора готовят путем разбавления не менее трех градуировочных растворов в диапазоне концентраций 0,100-1,500 мг/мл. Измерение оптической плотности приготовленных растворов проводят в кварцевых кюветах толщиной 10 мм относительно дистиллированной воды в максимуме поглощения при длине волны 262 нм. При построении градуировочной кривой используют либо абсолютную оптическую плотность (от нуля по оси ординат), либо скорректированную оптическую плотность, вычисляемую как разность оптической плотности при длине волны 262 нм и оптической плотности в минимуме поглощения (например, 300 нм).

В экспертной практике фенциклидин поступает на исследование в виде порошка с различными наполнителями, в виде пропитки на бумажных салфетках размером около 1 кв. см, а также нанесенный на табак, марихуану или петрушку. Следует отметить, что в последнем случае, т.е. если фенциклидин нанесен на части какого-либо растения, метод УФ-спектроскопии неприменим для количественного определения данного наркотического средства.

    При  поступлении  фенциклидина  на  исследование  в  виде  порошка  или

таблетки от образца отбирают навеску 10-20 мг (g) и растворяют в 10 мл (V )

                                                                         1

дистиллированной воды,  подкисленной 2-3  каплями концентрированной соляной

кислоты.  Затем  измерение  оптической  плотности  анализируемого  раствора

проводят  в тех же условиях,  что  и  оптической  плотности  градуировочных

растворов.   Далее  с  использованием  градуировочного  графика  определяют

содержание  фенциклидина   гидрохлорида   (Q)   в  исследуемом  образце  по

формуле (9).  При поступлении на исследование фенциклидина  в виде пропитки

на бумажной салфетке  от нее  отрезают 1/4 часть  (фрагмент размером  около

0,25 кв. см),  заливают 1 мл 5-10% соляной кислоты,  3 мл  дистиллированной

воды и помещают  на 30 мин.  в ультразвуковую баню  или просто  выдерживают

раствор в течение 30 мин., периодически встряхивая его.

    После этого  в кварцевую  кювету  с толщиной  поглощающего  слоя  10 мм

помещают  полученный  водный экстракт  и измеряют  его оптическую плотность

относительно  дистиллированной  воды при описанных выше условиях.  Далее по

градуировочному графику  определяют концентрацию фенциклидина  гидрохлорида

  ) в водном экстракте.  Содержание фенциклидина гидрохлорида на салфетке

  гр

определяют по формуле:

 

                             Q = С   x 4V ,                            (10)

                                  гр     0

 

    где:

    Q  - масса фенциклидина гидрохлорида, нанесенного на салфетку, мг;

 

    С    -    концентрация   фенциклидина   гидрохлорида,    найденная   по

     гр

градуировочному графику, мг/мл;

    V  - объем фотометрируемого раствора (значение равно 4 мл).

     0

 

Литература

 

1. Programme on Substance Abuse. Information Manual on Desinger Drugs. World Health Organization.

2. Neuninger H. Moderne Rauschgifte - Magie und Realitaet // Oesterreichische Apotheker Zeitung. 1989. Vol. 43. N 11. S. 332-336.

3. Словарь терминов, относящихся к алкоголю, наркотикам и другим психоактивным средствам. Женева: ВОЗ, 1996.

4. Drug of Abuse. U. S. Departament of Justice. DEA, 1996.

5. Let's All Work to Fight Drug Abuse. U. S. Departament of Justice. DEA.

6. Магидсон О.Ю., Федосова В.М. Синтез фенадона // Медицинская промышленность СССР. 1957. N 3. С. 25-28.

7. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 1986.

8. Recommended methods for testing Methaqualone/Mecloqualone. United Nations. Division of Narcotic Drugs. Austria. Vienna.

9. Kovar K-A., Grausam U. // Deutsche Apotheker Zeitung. 1987. Vol. 127. N 30. S. 1569-1574.

10. Kovar K-A. // Deutsche Apotheker Zeitung. 1988. Vol. 128. N 5. S. 253-256.

11. Schmidt-Semisch H. Wiener Zeitschrift fur Suchtforschung. 1996. Vol. 19. N 3/4. S. 3-16.

12. Sorokin V.I., Semkin E.P., Savilov A.P. // Microgramm. 1994. N 7. P. 221-226.

13. Харкевич Д.А. Фармакология. М.: Медицина, 1987.

14. Сатоскар Р.С., Бандаркар С.Д. Фармакология и фармакотерапия. М.: Медицина, 1986.

 

 



Все нормативно-правовые акты по медицине // Здравоохранение, здоровье, заболевания, лечение, лекарства, доктора, больницы //

Рейтинг@Mail.ru Яндекс цитирования

Copyright © Медицинский информационный ресурс www.hippocratic.ru, 2012 - 2018