:

:

 

6 2008 . N 11117

 

 

 

30 2007 . N 80

 

,

 

, .., , , -- ( - ), .

1996 , , , , . .

1996 2007 60 , 110 . . 120 , 86 - .

17 . 30.11.2007 - 12 , : 6 , 4 , 1 1 .

, . , , , 0,9% , , - 5%. , , , .

12 2007 25.10.2007 N 234- " " " " ( , 2007, N 44, . 5282), ) 3 1 2 10 07.02.1992 N 2300-1 " " ( , 1996, N 3, . 140) , , , 0,9%.

, , , , , 07.02.1992 N 2300-1 " " ( , 1996, N 3, . 140) , , 22.09.2003 N 1829/2003 , 2004 . 0,9% , .

- 2.3.2.2227-07 " N 5 - 2.3.2.1078-01 " " ( 16.06.2007, 9852), 01.09.2007, 0,9% , , , , , , .

, , , .

. 31.12.2004 N 13 " , " ( 18.02.2005 N 01/1203- ) .

9 2007 . , , 29816 (2006 . - 37879, 2005 . - 18872, 2004 . - 12956, 2003 . - 4300) . 652 (2006 . - 1452, 2005 . - 1443, 2004 . - 1552, 2003 . - 511), 2,2% (2006 . - 2,7%, 2005 . - 7,6%, 2004 . - 12%, 2003 . - 11,9%). - 3,8% (2006 . - 6,6%, 2005 . - 15,8%, 2004 . - 20,5%, 2003 . - 14,8%), - 5,6% (2006 . - 3,8%, 2005 . - 9,1%, 2004 . - 15,43%, 2003 . - 29,5%), "" ( ) - 3,3% (2006 . - 3,9%, 2005 . - 10,8%, 2004 . - 16,7%, 2003 . - 16,4%). 2007 . (9 2007 . - 5,1%, 2006 . - 1,3%).

, , 0,9%, 1% , 90% .

, 30.03.1999 N 52- " - " ( , 1999, N 14, . 1650; 2002, N 1 (. I), . 1; 2003, N 2, . 167; N 27 (. I), . 2700; 2004, N 35, . 3607; 2005, N 19, . 1752; 2006, N 1, . 10; 2006, N 52 (. I), . 5498; 2007, N 1 (. I), . 21; 2007, N 1 (. I), . 29; 2007, N 27, . 3213, 2007, N 46, . 5554) 01.01.2000 N 29- " " ( , 2000, N 2, . 150; 2002, N 1 (. I), . 2; 2003, N 2, . 167, N 27 (. I), . 2700; 2004, N 35, . 3607; 2005, N 19, . 1752, N 50, . 5242; 2006, N 1, . 10, N 14, . 1458) :

1. , , , , , , 0,9%.

2. :

2.1. 2.3.2.2306-07 "- -- " ( 1);

2.2. 4.2.2304-07 " -- " ( 2);

2.3. 4.2.2305-07 " , , () " ( 3).

3. :

3.1. , , 2008 ;

3.2. , ;

3.3. , ;

3.4. , , ;

3.5. 01.04.2008.

4. . , . -, , , , , .

5. .

6. " " 01.03.2008 " " -.

7. - , , - , .

8. ...

 

..

 

 

 

 

 

N 1

 

30.11.2007 . N 80

 

23.2.

 

-

--

 

2.3.2.2306-07

 

I.

 

1.1. -- ().

1.2. , , , .

1.3. , , , (, .).

 

II. ,

--

 

2.1. , :

- , (, , );

- ( , ; , );

- - ( , );

- ( , , );

- ( , , ( ) , ( , .), ( , , .), ( , ), (, ).

2.2. , , :

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- ;

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- ;

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- ;

- ;

- ( , , , , .);

- , .

.

2.3. , .

2.4. , , :

- , ( ; , , ( PIR, EMBL, SwissProt, GenBank .); , , ; pH, / ; in vitro; .);

- ( 90- , (-, .), - ;

- .

2.5. , , :

- , ( , ); in vitro IgE, , ; (); , ; ( .. in vivo);

- ( .) , -.

2.6. ( , ) , , :

- ( - , , );

- , .

2.7. - , , , , .

 

III. ,

--

 

3.1. , , .

3.2. , , , :

- ;

- ;

- ;

- ;

- .

 

IV. -

--

 

4.1. - ().

4.2. - , , :

- ( );

- ;

- ;

- ;

- .

 

V. -

--

 

5.1. V () .

5.2. :

- pH ;

- ;

- ;

- ;

- ;

- .

 

VI. -

--

 

6.1. VI () .

6.2. :

6.2.1. 2.3.2.1078-01 " " .

:

- ;

- ;

- ;

- ;

- ;

- ;

- ( ).

6.2.2. , . ( , , , , , , - , , , , ), , , , , , .

6.2.3. , , .

6.3. :

6.3.1.

 

┌─────────────────────────────┬───────────────────────────────────────────┐

├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤

├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤

40-50

├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤

70-80

├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤

│ │ 50

├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤

│ 2 :

│ ""

│ ;

│ "" │

├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤

├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤

│ 7-

├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤

│ │

│ ; ,

├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤

180

├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤

30- 180-

│,

│,

│ │

├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤

│ , 10/

└─────────────────────────────┴───────────────────────────────────────────┘

 

6.3.2. (). , . , .

. 1 - 2.

 

1

 

 

┌──────────────────────────┬────────┬─────┬───────┬────────┬──────────────┐

│ - ││ ││ │

├────────┼─────┼───────┼────────┼────────┬─────┤

%

├──────────────────────────┼────────┼─────┼───────┼────────┼────────┼─────┤

25,0 │20,20│ 0,38 - │ 84,22 │22,1 │

58,0 │0,58 │ - 50,2 │ 203,12 │53,3 │

5,0 - │ 4,99 - │ 44,91 │11,8 │

5,0 - │ 4,98 - │ 44,82 │11,8 │

│ <*> 4,0 - - - - -

│ / <**> 1,0 - - 1,0 4,00 │ 1,0 │

│ / <***> │ 0,1 - 0,1 - - -

2,0 - - - - -

├──────────────────────────┼────────┼─────┼───────┼────────┼────────┼─────┤

│ 100,1 │20,78│ 10,45 │ 51,2 │ 381,07 │ 100 │

└──────────────────────────┴────────┴─────┴───────┴────────┴────────┴─────┘

 

--------------------------------

<*> . 2.

<**> 1 : (B1) - 0,4 , (B2) - 0,6 , (B6) - 0,4 , - 3,0 , - 1,5 , - 0,2 , (B12) - 0,003 , - 0,1 , L- - 50 , - 1 .

<***> 0,1 : 800 ME, - 70 ME, - - 5 , - 0,1 .

 

2

 

 

N

,

1.

NaCl

139,3

2.

KH2PO4

388,8

3.

MgSO4

57,4

4.

CaCO3

380,4

5.

FeSO4 x 7H2O

26,4

6.

KI

0,77

7.

MnSO4 x 7H2O

4,55

8.

ZnSO4 x 7H2O

0,53

9.

CuSO4 x 5H2O

0,48

10.

CoCl2 x 6H2O

0,024

11.

NaF

0,50

12.

K2SO4Al2(SO4)3 x 24H2O

0,11

 

 

1000

 

6.3.3. :

6.3.3.1.

 

( ,
,
)

2

7

( ,
, , , , ,
, , , )

30- 180-

 

6.3.3.2.

 

- ;
- ;
- ;
- ();
-
();
-
();
- ;
- ;
-
(, , , ,
)

30- 180-

 

6.3.3.3.

6.3.3.3.1.

:

 

- ();
- (ACT);
- ;
- ;
- ;
- ;
- ;
- ;
- ;
- ;
- ;
- -;
- ;
- ;
- ;
- ;
- ;
- ;
- ;
- ;
- ;
- ;
-

30- 180-

 

6.3.3.3.2. . :

 

- ;
- ;
- ;
- pH;
- ;
- ;
-

30- 180-

 

6.3.3.3.3.

6.3.3.3.3.1.

 

┌────────────────────────────────────────────┬────────────────────────────┐

│ │

├────────────────────────────────────────────┼────────────────────────────┤

│ .│ 30- 180-

│ :

│ - ;

│ - ;

│ - ;

│ - ;

├────────────────────────────────────────────┤

│. : ,

│ -

└────────────────────────────────────────────┴────────────────────────────┘

 

6.3.3.3.3.2.

:

 

┌────────────────────────────────────────────┬────────────────────────────┐

│ │

├────────────────────────────────────────────┼────────────────────────────┤

│ 1- 2- 30- 180-

│ - -450;

│ - 7---;

│ - 7---;

│ - UDP-;

│ -

└────────────────────────────────────────────┴────────────────────────────┘

 

6.3.3.3.3.3.

1)

:

 

┌────────────────────────────────────────────┬────────────────────────────┐

│ │

├────────────────────────────────────────────┼────────────────────────────┤

30- 180-

│ - -;

│ - -;

│ - A B

└────────────────────────────────────────────┴────────────────────────────┘

 

2)

6.3.3.4.

 

┌─────────────────────────────┬───────────────────────────────────────────┐

├─────────────────────────────┼───────────────────────────────────────────┤

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│- ;

│- ; │1.

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│3.

├───────────────────────────────────────────┤

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│- ├───────────────────────────────────────────┤

│1. :

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│ )

│ .

│2. -

└─────────────────────────────┴───────────────────────────────────────────┘

 

6.4. 571/6 :

1) - ;

2) - () ;

3) - ;

4) Salmonella typhimurium ( ).

. 3 571/6.

 

3

 

571/6

 

571/6

Salmonella typhimurium

 

6.4.1.

 

┌───────────────────────┬─────────────────────────────────────────────────┐

571/6

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

18-20

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│ 2 :

│ ""

│ ;

│ ""

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│ <*>

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│ 7-

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│; ,

└───────────────────────┴─────────────────────────────────────────────────┘

 

--------------------------------

<*> . 6.3.2.

 

21 . .

6.4.2. :

1) .

21 ( 20 ) ( 20 ) 0,5 (20 . /). 7-, 14- 21- . . t- . M +/- m, M - , m - .

2) .

21 ( 15 ) ( 15 ) 0,5 (2 . /). - 0,02 (1 . /); - 0,02 0,95%- . 18-20 . ().

3) .

21 ( 15 ) ( 15 ) (2,5 / 0,5 ). 24 .

4) S. typhimurium S. typhimurium 415. 21 ( 30 ) ( 30 ) : 1000, 100, 10 /. 21 . 50, , .

6.5. : , ( IgG1 + IgG4) , ( "") ( ""). , (/) - () (/) .

6.5.1.

 

┌───────────────────────┬─────────────────────────────────────────────────┐

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

150-180

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

25

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│ 2 :

│ ""

│ ;

│ ""

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│ (. 4)

│ . │

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│ 7-

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│; ,

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

29

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

29-

└───────────────────────┴─────────────────────────────────────────────────┘

 

4

 

 

, 1

2,5

14,0

2

4,0

2,0

0,5

2

4,0

8,0

8,0

0,1

0,1

NaCl

0,15

3,69

1,28

12,42

,

76,0

 

6.5.2. :

1-, 3-, 5- / , 21- ("") , 10 . 29- /, 24 , . 0,1-0,2 .

. U- , - - Excel SPSS 11.5.

6.6. . in vivo. . - ( -).

6.6.1.

 

┌───────────────────────┬─────────────────────────────────────────────────┐

571/6

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

18-20

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

15

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│ 2 :

│ ""

│ ;

│ ""

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│ <*>

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│ 7-

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│; ,

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

30

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

30-

└───────────────────────┴─────────────────────────────────────────────────┘

 

--------------------------------

<*> . 6.3.2.

 

6.6.2. :

1) . 100 . , , () , . .

2) - ( -). , , . , , " ", . - (), , , , , /, .

200 - 400. 100 "-". "-" - .

6.7. :

1) ;

2) , .

6.7.1.

 

┌───────────────────────┬─────────────────────────────────────────────────┐

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

,

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

40-50

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

70-80

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

50

/\

/

30 , 20

+

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│ 2 :

│ ""

│ ;

│ ""

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│ <*>

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│ 7-

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│ 45-50

├───────────────────────┼─────────────────────────────────────────────────┤

│; ,

└───────────────────────┴─────────────────────────────────────────────────┘

 

--------------------------------

<*> . 6.3.2.

 

6.7.2. :

6.7.2.1.

 

( ,
,
)

2

7

 

6.7.2.2. ,

 


( ,

,
12- )


( ,
,
, , ,
)

 

6.7.2.3. ,

 

1. 7

19-20-

2. , ,
: ,
,
,
(
-
)

3. ( 5-
)

 

6.7.2.4. ,

 

1.

20-22-

2. ,
,
,
, ,

1-

3.
: ,
,
, , ,
;

1-30

4.

1, 4, 7, 14, 21 25

 

6.7.3. , , .

 

 

 

 

 

N 2

 

30.11.2007 . N 80

 

.

 

--

 

4.2.2304-07

 

I.

 

1.1. -- () .

1.2. , : 35S , NOS Agrobactetium tumefaciens , .

1.3. , , , .

 

II. , , ,

 

2.1. :

- ABI Prism 7000, iCycler iQ, Rotor Gene -3000 (6000), AHK-32, " -2" ;

- - "-001";

- "Mini-Sub Cell GT System" ;

- "Power Pac 300" 50-300 ;

- 12 , 300-400 ;

- "Gel Doc 2000 ",

,

, , - 10

( );

- "", 20 . C;

- (

-1

13000 . );

- "TERMO 24-15" 0,5 1,5 , 15 . C 120 . C, - 20 , - 0,2 . C, - 0,5 . C;

- -25 42 . C, 20 . C 60 . C, +/- 1 . C;

- "", 250-3000

-1

. ;

- ( 400 W);

- 2- 200 ;

- 220, pH +/- 0,01;

- "" ;

- -150;

- : 0,2-2,0 0,01 , +/- 1,2%; 0,5-10,0 0,01 , +/- 0,8%; 2-20 0,01 , +/- 0,8%; 20-200 0,1 , +/- 0,6%; 100-1000 1 , +/- 3%; 2-10 0,1 , +/- 0,5%.

2.2. :

- 10, 25, 100, 1000 , " " (Sigma), . N Z 327263-2 EA, Z 327301-2 , Z 327379-2 , Z 327476-2 ;

- 25, 50, 100, 250, 1000 , " " (Sigma), . N Z 329517-1 EA, Z 329525-1 EA, Z 329533-1 , Z 329541-1 EA, Z 329576-1 EA;

- 0,2, 0,5, 1,5 ;

- : 10; 20; 200; 1000 ; 10 .

2.3. :

- , " " (Sigma), . N 1758;

- , " " (Sigma), . N 7901;

- , " " (Sigma), . N 221465;

- , " " (Sigma), . N S 3014;

- (), " " (Sigma), . N 5134;

- (), " " (Sigma), . N 5882;

- () , " " (Sigma), . N 6791;

- (), " " (Sigma), . N 4287;

- , " " (Sigma), . N 4391;

- , " " (Sigma), N 459836;

- , " " (Sigma), . N 19516;

- , " " (Sigma), . N 151823;

- , " " (Sigma), . N W 4502;

- , " " (Sigma), . N W 3500;

- 2-, " " (Sigma), . N 3148;

- Taq-, 70 . C - 72 . C, " " (Sigma), . N 1806;

- MgCl2, " " (Sigma), . N 2192;

- ( ), " " (Sigma), . N 6877;

- , " " (Sigma), . N 1473;

- , " " (Fluka), . N 53198;

- , " " (Fluka), . N 44386;

- 2'--5' , (), " " (Sigma), . N 4788;

- 2'--5' , (), " " (Sigma), . N 4913;

- 2'--5' , (), " " (Sigma), . N 5038;

- 2'--5' , (), " " (Sigma), . N 9656;

- , "" ();

- (SDS), " " (Sigma), . N L 4390;

- 3%- , " " (Sigma), . N 7722.

2.4. , , .

 

III.

 

3.1. :

- 1 - HCl (pH 7,5) 100 12,11 () 80 , pH 7,5, , , -20 . C ;

- 5 NaCl 29,22 100 , , 1 ;

- 30%- NaOH 3 7 ;

- 0,5 (pH 8,0) 100 18,62 80 , 30%- pH 8,0, , , 1 .

3.2. , :

- 100 20 24 ;

- 4 . C 5 . C - 6 .

3.3. 70%- :

- 70 96%- 26 ;

- 4 . C 5 . C - 2 .

3.4. (20 /):

- 0,002 1 , 10 990 ;

- 20 . C - 6 .

3.5. (2%- ""):

- 0,5 10 , 2,5 1M - HCl, 7 5 NaCl, 1 0,5 , 25 , ;

- 4 . C 5 . C - 6 .

3.6. 1 x :

- 1000 10,8 () , 5,5 0,92 , , ;

- 1 - 10 .

3.7. - C21H20N3Br (10 /):

- 1 100 ;

- 4 . C 5 . C - 12 .

3.8. :

- 1 , 0,5 NaCl, 100 , 30%- pH 8,0, 200 ;

- 4 . C 6 .

3.9. 1,2 NaCl:

- 7,0 NaCl 100 , ;

- 1 .

3.10. 10%- SDS:

- 10 SDS 90 ;

- 1 .

 

IV.

 

4.1. :

- 100 1,5 ;

- 300 , ;

- 500 - , ;

- 65 . C 90 ;

- 10 13000 ./.;

- 500 1,5 ;

- 500 , 30 ;

- 10 13000 ./.;

- 500 , 500 , ;

- 5 13000 ./.;

- 1,5 , ;

- 2 - , ;

- 60 ;

- 5 13000 ./.;

- ;

- 350 NaCl (1,2);

- 350 , 30 ;

- 10 13000 ./.;

- 1,5 ;

- 0,6 , ;

- 10 13000 ./.;

- ;

- 500 70%- ;

- 10 13000 ./.;

- ;

- 5 65 . C ;

- 100 , , ();

- 20 . C.

4.2. :

- 1,5 300 70 - 80 , 0,5 5 Na2- 30-60 65 . C;

- 400 , , 65 . C 60-120 ;

- , 500 , ;

- 1 12000 ./., ;

- 20 , 10 10-20 ./.;

- 10 12000 ./.;

- , 200 , , 10 12000 ./.;

- , 1 , 5-10 , 10 12000 ./.;

- , ;

- 1 , , 10 12000 ./., ;

- ;

- 65 . C 4-5 :

- 50 , , ;

- 5-10 , 10 65 . C;

- , 1 12000 ./.;

- , 20 . C.

 

V.

 

5.1. .

5.1.1. , :

- :

1) 5' GCC CTC TAC TCC ACC CCC ATC C 3';

2) 5' GCC CAT CTG CAA GCC TTT TTG TG 3';

- , 10 :

 

,

193,70

MgCl2 (10x)

25,00

(4 )

12,50

1 (20 )

6,25

2 (20 )

6,25

Taq- (5 /)

1,30

 

- , 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./95 . C

30 ./95 . C, 30 ./60 . C,
40 ./72 . C

40

3 ./72 . C

4 . C

 

- , - 118 , 2.1.

5.1.2. , :

- :

1) 5' TGC TTG CAT TGT TCG CTC TCC TAG 3';

2) 5' GTC GCA GTG ACA TTG TGG CAT 3';

- , 10 :

 

,

193,70

MgCl2 (10x)

25,00

(4 )

12,50

1 (20 )

6,25

2 (20 )

6,25

Taq- (5 /)

1,30

 

- , 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./95 . C

1 ./94 . C, 1 ./60 . C,
1 ./72 . C

40

7 ./72 . C

4 . C

 

- , - 329 , 2.2.

5.1.3. , :

- :

1) 5' GTC TCC TTG GCT TGT CAT TTT ATG C 3';

2) 5' CAA GTT AGC TGC CAT CAT TCT GGC C 3';

- , 10 :

 

,

188,70

MgCl2 (10x)

25,00

(4 )

12,50

1 (20 )

6,25

2 (20 )

6,25

Taq- (5 /)

1,30

 

- 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./95 . C

1 ./94 . C, 1 ./60 . C,
1 ./72 . C

40

7 ./72 . C

4 . C

 

- , - 1149 , 2.3.

5.2. .

5.2.1. 35 S:

- :

1) 5' GCT CCT ACA AAT GCC ATC A 3';

2) 5' GAT AGT GGG ATT GTG CGT CA 3';

- , 10 :

 

,

169,0

MgCl2 (10x)

29,0

(20 /)

29,0

(4 )

14,0

1 (20 )

7,0

2 (20 )

7,0

Taq- (5 /)

1,5

 

- , 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./94 . C

20 ./94 . C, 40 ./54 . C,
60 ./72 . C

40

3 ./72 . C

1 ./4 . C

0,77 . C/.

3,15 . C/.

 

- , - 195 , 2.4.

5.2.2. NOS:

- :

1) 5' GAA TCC TGT TGC CGG TCT TG 3';

2) 5' TTA TCC TAG TTT GCG CGC TA 3';

- , 10 :

 

,

169,0

MgCl2 (10x)

29,0

(20 /)

29,0

(4 )

14,0

1 (20 )

7,0

2 (20 )

7,0

Taq- (5 /)

1,5

 

- , 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./94 . C

20 ./94 . C, 40 ./54 . C,
60 ./72 . C

40

3 ./72 . C

1 ./4 . C

 

- , - 180 , 2.5.

5.2.3. npt II:

- :

1) 5' GGA TCT CCT GCT ATC T 3';

2) 5' GAT CAT CCT GAT CGA C 3';

- , 10 :

 

,

16,53

MgCl2 (10x)

3,30

(20 /)

3,30

(4 )

0,62

1 (32 /)

0,40

2 (59 /)

0,20

Taq- (5 /)

0,15

 

- 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./94 . C

30 ./95 . C, 50 ./50 . C,
40 ./72 . C

40

3 ./72 . C

4 . C

 

- , - 173 , 2.6.

5.3. .

5.3.1. 40-3-2:

- 1- , :

1) 5'CCA CTG ACG TAA GGG ATG ACG 3';

2) 5'CAT GAA GGA CCG GTG GGA GAT 3';

- , 10 :

 

,

188,70

MgCl2 (10x)

25,00

(4 )

12,50

1 (20 )

6,25

2 (20 )

6,25

Taq- (5 /)

1,30

 

- , 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./95 . C

30 ./95 . C, 30 ./60 . C,
40 ./72 . C

25

3 ./72 . C

4 . C

 

- , 2- ;

- 2- , :

3) 5' ATC CCA CTA TCC TTC GCA AGA 3';

4) 5' TGG GGT TTA TGG AAA TTG GAA 3';

- , 10 :

 

,

193,70

MgCl2 (10x)

25,00

(4 )

12,50

3 (20 )

6,25

4 (20 )

6,25

Taq- (5 /)

1,30

 

- , 30 3000 ./., 24,5 , 0,5 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./95 . C

30 ./95 . C, 30 ./60 . C,
40 ./72 . C

35

3 ./72 . C

4 . C

 

- , 169 , 2.7.

5.3.2. A2704-12:

- :

1) 5' GGC GTT CGT AGT GAC TGA GG 3';

2) 5' GTT TTA CAA CGT CGT GAC TGG 3';

- , 10 :

 

,

169,0

MgCl2 (10x)

29,0

(20 /)

29,0

(4 )

14,0

1 (20 )

7,0

2 (20 )

7,0

Taq- (5 /)

1,5

 

- , 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./94 . C

20 ./94 . C, 40 ./54 . C,
60 ./72 . C

40

3 ./72 . C

4 . C

 

- , - 185 , 2.8.

5.3.3. 5547-127.

- :

1) 5' TGT GGT TAT GGC GGT GCC ATC 3';

2) 5' TGC TAC AGG CAT CGT GGT GTC 3';

- , 10 :

 

,

169,0

MgCl2 (10x)

29,0

(20 /)

29,0

(4 )

14,0

1 (20 )

7,0

2 (20 )

7,0

Taq- (5 /)

1,5

 

- , 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./94 . C

20 ./94 . C, 40 ./54 . C,
60 ./72 . C

40

3 ./72 . C

4 . C

 

- , - 150 , 2.9.

5.3.4. Bt 176:

- 1- , :

1) 5' CGG CCC CGA GTT CAC CTT 3';

2) 5' CTG CTG GGG ATG ATG TTG TTG 3';

- , 10 :

 

,

188,70

MgCl2 (10x)

25,00

(4 )

12,50

1 (20 )

6,25

2 (20 )

6,25

Taq- (5 /)

1,30

 

- 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./95 . C

40 ./95 . C, 40 ./60 . C,
40 ./72 . C

25

3 ./72 . C

4 . C

 

- , 2- ;

- 2- , :

3) 5' CCG CAC CCT GAG CAG CAC 3';

4) 5' GGT GGC ACG TTG TTG TTC TGA 3';

- , 10 :

 

,

193,70

MgCl2 (10x)

25,00

(4 )

12,50

3 (20 )

6,25

4 (20 )

6,25

Taq- (5 /)

1,30

 

- , 30 3000 ./., 24,5 , 0,5 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./95 . C

40 ./95 . C, 40 ./60 . C,
40 ./72 . C

35

3 ./72 . C

4 . C

 

- , - 189 , 2.10.

5.3.5. MON 810:

- 1- , :

1) 5' TAT CTC CAC TGA CGT AAG GGA TGA C 3';

2) 5' TGC CCT ATA ACA CCA ACA TGT GCT T 3';

- , 10 :

 

,

188,70

MgCl2 (10x)

25,00

(4 )

12,50

1 (20 )

6,25

2 (20 )

6,25

Taq- (5 /)

1,30

 

- , 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./95 . C

45 ./95 . C, 50 ./60 . C,
50 ./72 . C

35

3 ./72 . C

4 . C

 

- 2- , :

3) 5' ACT ATC CTT CGC AAG ACC CTT CCTC 3';

4) 5' GCA TTC AGA GAA ACG TGG CAG TAA C 3';

- , 10 :

 

,

193,70

MgCl2 (10x)

25,00

(4 )

12,50

3 (20 )

6,25

4 (20 )

6,25

Taq- (5 /)

1,30

 

- 30 3000 ./., 24,5 , 0,5 , , (30 3000 ./.), ;

- :

 

3 ./95 . C

45 ./95 . C, 50 ./60 . C,
50 ./72 . C

40

3 ./72 . C

4 . C

 

- , - 149 , 2.11.

5.3.6. MON 863:

- :

1) 5' GTA GGA TCG GAA AGC TTG GTA C 3';

2) 5' TGT TAC GGC CTA AAT GCT GAA CT 3';

- , 10 :

 

,

169,0

MgCl2 (10x)

29,0

(20 /)

29,0

(4 )

14,0

1 (20 )

7,0

2 (20 )

7,0

Taq- (5 /)

1,5

 

- 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./94 . C

20 ./94 . C, 40 ./54 . C,
60 ./72 . C

40

3 ./72 . C

1 . - 4 . C

 

- , 84 , 2.12.

5.3.7. NK 603:

- :

1) 5' AGT AAT GAC CTC GAG TAA GCT TGT TAA 3';

2) 5' AAG AGA TAA CGA GAT CCA CTC AAA CAC T 3';

- , 10 :

 

,

169,0

MgCl2 (10x)

29,0

(20 /)

29,0

(4 )

14,0

1 (20 )

7,0

2 (20 )

7,0

Taq- (5 /)

1,5

 

- , 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./94 . C

20 ./94 . C, 40 ./54 . C,
60 ./72 . C

40

3 ./72 . C

1 . - 4 . C

 

- , - 108 , 2.13.

5.3.8. Bt 11:

- :

1) 5' CCA TTT TTC AGC TAG GAA GTT C 3';

2) 5' TCG TTG ATG TTK GGG TTG TTG TCC 3';

- , 10 :

 

,

169,0

MgCl2 (10x)

29,0

(20 /)

29,0

(4 )

14,0

1 (20 )

7,0

2 (20 )

7,0

Taq- (5 /)

1,5

 

- , 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

10 ./95 . C

30 ./95 . C, 60 ./63 . C,
60 ./72 . C

10

30 ./95 . C, 30 ./60 . C,
30 ./95 . C

30

7 ./72 . C

1 . - 4 . C

 

- , - 110 , 2.14.

5.3.9. T 25:

- :

1) 5' GCC AGT TAG GCC AGT TAC CCA 3';

2) 5' TGA GCG AAA CCC TAT AAG AAC CCT 3';

- , 10 :

 

,

169,0

MgCl2 (10x)

29,0

(20 /)

29,0

(4 )

14,0

1 (20 )

7,0

2 (20 )

7,0

Taq- (5 /)

1,5

 

- , 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

10 ./95 . C

30 ./95 . C, 60 ./63 . C,
60 ./72 . C

10

30 ./95 . C, 30 ./60 . C,
30 ./95 . C

30

7 ./72 . C

1 . - 4 . C

 

- , - 149 , 2.15.

5.3.10. GA 21:

- :

1) 5' ACG GTG GAA GAG TTC AAT GTA TG 3';

2) 5' TCT CCT TGA TGG GCT GCA 3';

- , 10 :

 

,

169,0

MgCl2 (10x)

29,0

(20 /)

29,0

(4 )

14,0

1 (20 )

7,0

2 (20 )

7,0

Taq- (5 /)

1,5

 

- 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./94 . C

20 ./94 . C, 40 ./54 . C,
60 ./72 . C

40

3 ./72 . C

1 . - 4 . C

 

- , - 270 , 2.16.

5.3.11. MIR 604:

- :

1) 5' GGT ACC CAT TTG GCG CCG AT 3';

2) 5' CAG CGT TGC GGT TCT GTC AG 3';

- :

 

,

0,5

1 (20 )

1,0

2 (20 )

1,0

2,5

Taq-

0,2

19,8

 

- :

 

,

1 M KCL

500

100 dATP

20

100 dCTP

20

100 dTTP

20

100 dGTP

20

100 MgC2

150

170

1 Tris-HCl-pH 8,3

100

 

- :

 

4 ./94 . C

30 ./95 . C, 30 ./55 . C,
2 ./72 . C

34

5 ./72 . C

/4 . C

 

- , - 895 , 2.17.

5.3.12. MON 88017:

- :

1) 5' GAG CAG GAC CTG CAG AAG CT 3';

2) 5' TCC GGA GTT GAC CAT CCA 3';

- :

 

,

0,5

1 (20 )

1,0

2 (20 )

1,0

2,5

Taq-

0,2

19,8

 

- :

 

,

1 M KCL

500

100 dATP

20

100 dCTP

20

100 dTTP

20

100 dGTP

20

100 MgC2

150

170

1 Tris-HCl-pH 8,3

100

 

- :

 

4 ./94 . C

30 ./95 . C, 30 ./55 . C,
2 ./72 . C

34

5 ./72 . C

/4 . C

 

- , - 94 , 2.18.

5.3.13. 7-1:

- :

1) 5' TGG GAT CTG GGT GGC TCT AAC T 3';

2) 5' AAT GCT GCT AAA TCC TGA G 3';

- , 10 :

 

,

169,0

MgCl2 (10x)

29,0

(20 /)

29,0

(4 )

14,0

1 (20 )

7,0

2 (20 )

7,0

Taq- (5 /)

1,5

 

- , 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./94 . C

20 ./94 . C, 40 ./54 . C,
60 ./72 . C

40

3 ./72 . C

1 ./4 . C

 

- , - 110 , 2.19.

5.3.14. LL 62:

- :

1) 5' AGC TGG CGT AAT AGC GAA GAG G 3';

2) 5' TGC TAA CGG GTG CAT CGT CTA 3';

- , 10 :

 

,

169,0

MgCl2 (10x)

29,0

(20 /)

29,0

(4 )

14,0

1 (20 )

7,0

2 (20 )

7,0

Taq- (5 /)

1,5

 

- , 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

3 ./94 . C

20 ./94 . C, 40 ./54 . C,
60 ./72 . C

40

3 ./72 . C

1 ./4 . C

 

- , - 88 , 2.20.

5.3.15. , , , 2904/1 kgs, 1210 amk:

- 1- , :

1) 5' CTA CCA CTA AGG ATG TTA TCC 3';

2) 5' ATG CAC TCA CGT AGT CCT CC 3';

- , 10 :

 

,

161,3

MgCl2 (10x)

33,0

(20 /)

33,0

(10 )

6,2

1 (20 )

2,5

2 (20 )

2,5

Taq- (5 /)

1,5

 

- , 30 3000 ./., 24,0 , 1,0 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

2 ./98 . C

30 ./95 . C, 30 ./60 . C,
40 ./72 . C

20

3 ./72 . C

4 . C

 

- 2- ;

- 2- , :

3) 5' CTA CCA CTA AGG ATG TTA TCC 3';

4) 5' TTG TAT AGA AGC TCA CGA GG 3';

- , 10 :

 

,

164,8

MgCl2 (10x)

33,0

(20 /)

33,0

(10 )

6,2

3 (20 )

2,5

4 (20 )

2,5

Taq- (5 /)

1,5

 

- , 30 3000 ./., 24,5 , 0,5 , , 30 3000 ./., ;

- :

 

2 ./98 . C

30 ./95 . C, 30 ./60 . C,
40 ./72 . C

40

3 ./72 . C

4 . C

 

- , - 102 , 2.21.

 

VI.

 

6.1. 2%- :

- 1 50 1 , ;

- 2-5 15 ;

- 56 . C, 5 , , , 0,5-0,7 , 30-40 ;

- 1 +4 . C.

6.2. :

- 10 , :

- 1 , ~ 2-3 ;

- 100V 70-90 ;

- ( ) ;

- - , .

 

VII.

 

7.1. :

- 35S- :

5' CGG CTA CTC CAA GAA TAT CAA AGA TAC AGT TTC AGA AGA (39 ..),

5' CCA TTT TCC TTT TTT ATT GTC CTT TCG ATG AAG TGA CAG A (40 ..);

- gus Escherichia coli:

5' ACC GTA CCT CGC ATT ACC CTT ACG CTG AAG AGA (33 ..),

5' TGC CCG CTT CGA AAC CAA TGC CTA AAG AGA (30 ..);

- nos Agrobacterium tumefaciens:

5' GGA CAA GCC GTT TTA CGT TTG GAA CTG ACA GA (32 ..),

5' GCC TGA CGT ATG TGC TTA GCT CAT TAA ACT CCA GA (35 ..);

- nptII Tn5 :

5' GTG ACC CAT GGC GAT GCC TGC TTG C (25 ..),

5' ACC CAG CCG GCC ACA GTC GAT GAA TCC AGA (30 ..):

- ocs Agrobacterium tumefaciens:

5' AAA AAG TGG CAG AAC CGG TCA AAC CTA AAA GA (32 ..),

5' CGT TAT TAG TTC GCC GCT CGG TGT GTC GTA GA (32 ..).

7.2. () :

- , Taq , , , , 1 . 200 2,5 , :

- ;

- ;

- "+" - 1 , 0,5 .

7.3. :

- : "-" ", " ", "+" ";

- 5 , 10 ;

- , , 5 , - 5 , - 5 ;

- 20 ;

- ;

- :

 


 

 

 

 

 

 

, . C

,

1)

94

180

1

 

2)

94

30

42

 

3)

62,5

30

 

4)

72

180

1

 

 

- .

7.4. , :

- 20 x SSC - 50 , () - 100 , - 0,1 1 /, 1 ;

- 20 x SSC (3 NaCl, 0,3 , pH 7,4): 2 x SSC, 0,1% SDS; 0,1 x SSC; 0,1 x SSC, 0,1% SDS; 0,01 x SSC;

- 100 :

 

20 x SSC,

10%- SDS,

H2O .,

2 x SSC, 0,1% SDS

10,00

1

89,00

0,1 x SSC

0,50

-

99,50

0,1 x SSC, 0,1% SDS

0,50

1

98,50

0,01 x SSC

0,05

-

99,95

 

- 1-2 , 5 20 x SSC 0,2 10% SDS, , 1-2 3000 /, , ;

- , 1 42 . C;

- 2 x SSC, 0,1% SDS, 2 x SSC, 0,1% SDS - 1 5 , 0,1 x SSC, 0,1% SDS - 2 5 , 0,1 x SSC - 5 1 , 0,01 x SSC - 10 .

7.5. :

- - 200 1 x SSC, 1% ( ), 25 ;

- 25 - 30 30 ;

- 1 x SSC;

- 2 x SSC, 5 ;

- 1 x SSC;

- - (), 1 . 0,1 x SSC, 30 . 3%- , ;

- , 2 10 ;

- ;

- , 42 . C 5-10 , .

7.6. :

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7.7. :

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7.8. :

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VIII.

 

8.1. :

- , ;

- , , 35 S , ;

- :

1) 5' TCC ACC CCC ATC CAC ATT T 3';

2) 5' GGC ATA GAA GGT GAA GTT GAA GGA 3';

3) 5'-FAM-AAC CGG TAG CGT TGC CAG CTT CG-TAMRA-3';

81 ;

- :

4) 5' GCC TCT GCC GAC AGT GGT 3';

5) 5' AAG ACG TGG TTG GAA CGT CTT C 3';

6) 5'-FAM-CAA AGA TGG ACC CCC ACC CAC G-TAMRA-3';

82 ;

- , :

 

,

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200 )

10,00

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0,25

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5,00

 

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5 /

1, 2

900 /

dUTP

400 /

dATP, dCTP, dGTP
(2,5 / )

200 /

3

100 /

50,00

 

- , :

 

,

(
200 )

10,00

Taq- (5 /)

0,25

MgCl2 (10 X)

5,00

 

MgCl2 (25 /)

5 /

4, 5

900 /

dUTP

400 /

dATP, dCTP, dGTP
(2,5 / )

200 /

6

100 /

50,00

 

- ;

- :

 


2 ./50 . C

10 ./95 . C

15 ./95 . C,
60 ./60 . C


45

 

- , 2.22.

8.2. :

- , , ;

- , , 35 S , , GA 21;

- :

1) 5' CAC TCC ATC GTG GAG AGC TT 3';

2) 5' GGC GTT GTT GAA GAG GAA GA 3';

3) 5'-FAM-TAC CCC ACA CGA GCC ATC TAC GAC T-TAMRA-3';

111 ;

- , :

4) 5' CGT CTT CAA AGC AAG TGG ATT G 3';

5) 5' TCT TGC GAA GGA TAG TGG GAT T 3';

6) 5'-FAM-TCT CCA CTG ACG TAA GGG ATG ACG CA-TAMRA-3';

79 ;

- , :

 

,

(
200 )

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0,25

MgCl2 (10 X)

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MgCl2 (25 /)

5 /

1, 2

900 /

dUTP

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dATP, dCTP,
dGTP (2,5 / )

200 / <