"Определение непищевых красителей Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red в пищевых продуктах и биологически активных добавках к пище. Методические указания. МУК 4.1.2483-09" // Портал о здоровье, заболеваниях и лечении, о лекарствах, о докторах и больницах.

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной

службы по надзору в сфере

защиты прав потребителей

и благополучия человека,

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

5 февраля 2009 г.

Дата введения:

с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕПИЩЕВЫХ КРАСИТЕЛЕЙ СУДАН I, СУДАН II,

СУДАН III, СУДАН IV И PARA RED В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВКАХ К ПИЩЕ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.1.2483-09

1. Методические указания разработаны ГУ НИИ питания РАМН (академик РАМН В.А.Тутельян, к.т.н. В.Г.Байков, к.х.н. В.В.Бессонов, Ю.В.Ведищева, к.ф.н. О.И.Передеряев, Е.П.Хромченкова).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 3 от 25.12.2008).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 05.02.2009.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Введение

Красители Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red (Пара Ред) (далее - Судан I-IV и Para Red) в сферах экономики используются при производстве дизельного топлива, в легкой промышленности для окрашивания тканей, а также при проведении биохимических исследований для окрашивания препаратов, и относятся к непищевым красителям.

Необходимость определения непищевых красителей Судан I-IV и Para Red (Пара Ред) обусловлено их использованием при фальсификации специй и пряностей, а также продуктов их переработки, БАД к пище, изготовленных с использованием специй и пряностей, и других пищевых продуктов, в состав которых входят специи и пряности, с целью придания им более интенсивной окраски.

1. Общие положения и область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают методику определения возможного присутствия непищевых красителей Судан I-IV и Para Red в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в специях, пряностях и продуктах их переработки, а также в биологически активных добавках к пище (БАД) и других пищевых продуктов (в состав которых входят специи и пряности).

1.2. Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, находящиеся в обращении на территории Российской Федерации, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, а также могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке.

1.3. Присутствие непищевых красителей Судан I-IV и Para Red в пищевых продуктах в пределах обнаружения данным методом является основанием для запрещения продукции к реализации.

2. Краткая характеристика красителей Cудан I, Cудан II,

Cудан III, Cудан IV и Para Red (Пара Ред)

Судан I, Судан II, Судан III, Судан IV и Para Red (Пара Ред) являются синтетическими непищевыми красителями, практически нерастворимыми в воде, хорошо растворимыми в органических растворителях (хлороформе, ацетоне, эфире), и имеющих интенсивную окраску от оранжевого до ярко-красного цвета. Структура непищевых красителей Судан I-IV и Para Red приведена на рис. 1 (не приводится).

R1 R2 R3

Судан I H H H

Судан II H CH3 H

Судан III H H Ph-N=N-

Судан IV CH3 H o-CH3-Ph-N=N-

Para Red (Пара Ред) H H NO2

Рис. 1 Структура непищевых красителей Судан I-IV

и Para Red (Пара Ред)

Рисунок не приводится.

3. Принцип метода определения красителей Судан I-IV

и Para Red

Обнаружение и определение содержания непищевых красителей Судан I-IV и Para Red (Пара Ред) проводится методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с диодно-матричным детектированием (при длине волны 504 нм). В качестве арбитражного метода используют метод ВЭЖХ с масс-детектированием (по молекулярным и дочерним ионам, - см. таблицу 1).

Таблица 1

Параметры масс-детектирования представлены

┌───────────────┬────────────────┬────────────┬────────────────────┐

│ Наименование │ Молекулярные │ Энергия │ Основные дочерние │

│ │ ионы, m/z │ разрушения │ ионы, m/z │

├───────────────┼────────────────┼────────────┼──────┬───────┬─────┤

│ │ + │ │ │ │ │

│Para Red │294 (M+H ) │ 0,9 │ 277 │ 156 │ - │

├───────────────┼────────────────┼────────────┼──────┼───────┼─────┤

│ │ + │ │ │ │ │

│Судан-I │249 (M+H ) │ 1,0 │ 232 │ 156 │ - │

│ │ + │ │ │ │ │

│Судан-II │277 (M+H ) │ 1,2 │ 260 │ 156 │ 120 │

│ │ + │ │ │ │ │

│Судан-III │352 (M+H ) │ 1,2 │ 197 │ 336 │ 156 │

│ │ + │ │ │ │ │

│Судан-IV │382 (M+H ) │ 1,2 │ 224 │ 364 │ 156 │

└───────────────┴────────────────┴────────────┴──────┴───────┴─────┘

4. Средства измерения, материалы и реактивы

- Высокоэффективный жидкостной хроматограф.

- Хроматографическая колонка C18, 5мю, 4,6x250 мм.

- Ультразвуковая баня.

- Весы лабораторные общего назначения с пределом взвешивания 100 г и погрешностью + 0,0001 г.

- Дистиллятор.

- Установка для фильтрования и дегазирования подвижной фазы.

- pH-метр лабораторный.

- Центрифуга лабораторная ОПН-8 8000 об./мин.

- Мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

- Пипетки 2-1-2-1 или 1-1-2-1, 2-1-2-10 или 2-2-2-10 или 3-2-2-10 по ГОСТ 29227.

- Колбы мерные К 1-50-1, К 1-50-2 по ГОСТ 1770-74.

- Вода дистиллированная.

- Ацетонитрил для жидкостной хроматографии.

- Тетрагидрофуран для жидкостной хроматографии.

- Трифторуксусная кислота квалификации "ОСЧ".

- Ацетон квалификации "ХЧ".

5. Определение содержания Суданов I-IV и Para Red

методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

5.1. Подготовка стандартных растворов

Навеску стандартного вещества около 0,02 г (с точностью 0,0001 г) помещают в мерную колбу на 100 мл, добавляют 30 мл 95% этанола, интенсивно встряхивают, при необходимости озвучивают на ультразвуковой бане до полного растворения вещества. После этого объем доводят до метки 95% этанолом (основной раствор). В мерную колбу на 50 мл помещают 1 мл основного раствора и доводят объем до метки 95% этанолом (рабочий раствор). Полученный рабочий раствор фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Приготовленные стандартные растворы хранят в прохладном месте в течение 1 месяца.

5.2. Подготовка проб для анализа

Около 1,0 г (точная навеска) образца помещают во флакон, объемом 20 мл с завинчивающейся крышкой, добавляют 10 мл ацетона, интенсивно встряхивают в течение 2 минут и озвучивают на ультразвуковой бане в течение 5 минут. После озвучивания образец снова встряхивают и центрифугируют на 6000 об./мин. После центрифугирования супернатант отбирают и исследуют. При необходимости отобранный супернатант фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

При подготовке контрольных образцов указанным способом извлекается более 95% добавленного количества каждого из исследуемых красителей.

5.3. Приготовление подвижной фазы

При постоянном перемешивании к бидистиллированной воде добавляют по каплям трифторуксусную кислоту до pH = 2,4 и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Подвижная фаза хранится в холодильнике при температуре 2-8 град. C не более 3 месяцев.

5.4. Проведение анализа ВЭЖХ

Идентификацию компонентов на хроматограмме осуществляют путем сравнения со временем удерживания стандарта красителя, УФ и видимого спектра. Для подтверждения рекомендуется сравнивать также молекулярные массы каждого компонента и его дочерних ионов.

Идентификация красителей Судан I-IV и Para Red только по времени удерживания не будет являться достоверной, ввиду сложного матрикса исследуемых объектов, и наличия природных компонентов, обладающих сходными спектральными характеристиками и хроматографическим поведением.

5.5. Условия хроматографического анализа

Колонка 5u C18(2), 5мю, 4,6x250 мм

Приготовление подвижной фазы: бидистиллированную воду доводят трифторуксусной кислотой до pH 2,4 (мл на 1 л бидистиллированной воды).

Подвижная фаза: смесь ацетонитрила (А) и бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до pH = 2,4 (Б). Оптимальным является градиентное элюирование смесью ацетонитрила (А) и бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до pH = 2,4 (Б): 0 мин. - 80% (А), 10 мин. - 98%(А) (градиент линейный), 20 мин. - 98%(А), 21 мин. - 80%(А). Регенерация колонки занимает не менее 9 мин. Общее время анализа составляет 30 минут.

В случае использования только диодно-матричного детектора вместо бидистиллированной воды, подкисленной трифторуксусной кислотой до pH = 2,4 допускается использование бидистиллированной воды. Также возможно использование изократического элюирования смесью ацетонитрила - бидистиллированной воды с содержанием ацетонитрила 90-95% (в зависимости от параметров колонки).

Для полной регенерации колонки следует использовать подвижную фазу на основе тетрагидрофурана, обладающего такой же элюирующей силой, как и ацетон.

Скорость подачи подвижной фазы: 1,0 куб. см/мин.

Детектирование: лямбда = 504 нм.

Объем вводимой пробы 5 мкл.

Порядок выхода и параметры количественного определения непищевых красителей Судан I-IV и Para Red приведены в таблице 2. Пример хроматограммы смеси стандартов Судан I-IV и Para Red представлен на рисунке 2 (не приводится).

Проведение количественного определения красителей Судан I-IV и Para Red не является обязательным, т.к. их применение в пищевых продуктов не допускается, поскольку они являются не пищевыми веществами, и их присутствие в пределах обнаружения данного метода является основанием для запрещения продукции к реализации. Пределы обнаружения красителей Судан 1-4 и Пара Ред приведены в Таблице 2.

Таблица 2

Пределы обнаружения непищевых красителей Судан I-IV

и Пара Ред в специях, пряностях, продуктах их

переработки и БАД к пище

N	Наименование красителя	Предел обнаружения на диодной матрице, мг/кг	Предел обнаружения на масс-детекторе, мг/кг
1.	Para Red	0,5	0,5
2.	Судан-I	0,5	0,5
3.	Судан-II	0,5	0,5
4.	Судан-III	0,5	0,5
5.	Судан-IV	0,5	0,5

Количественное определение <*>

--------------------------------

<*> Проведение количественного определения красителей Судан I-IV и Para Red не является обязательным, т.к. их применение в пищевых продуктов не допускается.

Количественное определение проводят абсолютной градуировкой.

Содержание красителей Судан I-IV и Para Red проводят по следующей формуле:

S2 x C1 x V

C, мг/кг = -----------,

S1 x m

где:

C, мг/кг - содержание красителя, мг/кг.

C1 - концентрация красителя в стандартном растворе, мкг/мл.

S1 - площадь пика красителя в стандартном растворе.

S2 - площадь пика красителя в определяемом образце.

V - объем раствора образца, мл.

m - масса навески, г.

Таблица 3

Основные метрологические показатели

┌───┬────────────┬────────────────────────┬────────────────────────┐

│ N │Наименование│ Граница относительной │ Стандартное отклонение │

│ │ │погрешности (+/- дельта)│повторяемости (сигма ) %│

│ │ │ в % при Р = 0,95 │ r │

├───┼────────────┼────────────────────────┼────────────────────────┤

│1. │Para Red │ 2,1 │ 3,2 │

│2. │Судан-I │ 3,6 │ 3,5 │

│3. │Судан-II │ 2,8 │ 3,8 │

│4. │Судан-III │ 3,3 │ 4,9 │

│5. │Судан-IV │ 3,9 │ 4,3 │

└───┴────────────┴────────────────────────┴────────────────────────┘

Таблица 4

Параметры определения непищевых красителей Судан I-IV

и Para Red

N	Наименование	Время удерживания, мин.
1.	Para Red	6,2
2.	Судан-I	7,5
3.	Судан-II	10,9
4.	Судан-III	12,9
5.	Судан-IV	15,5

Рис. 2. Пример хроматограммы смеси стандартов Судан I-IV

и Para Red

Рисунок не приводится.