УТВЕРЖДАЮ

Начальник управления

по внедрению новых лекарственных

средств и медицинской техники

Министерства здравоохранения СССР

Ю.Г.БОБКОВ

10 сентября 1986 г.

 

УТВЕРЖДАЮ

Начальник Главного управления

карантинных инфекций Министерства

здравоохранения СССР

В.П.СЕРГИЕВ

19 сентября 1986 г. N 28-6/26

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО СТЕРИЛИЗАЦИИ КСЕНОБИОПРОТЕЗОВ РАСТВОРОМ

ГЛУТАРОВОГО АЛЬДЕГИДА

 

1. Общие положения

 

1.1. Методические указания предназначены для работников лечебно - профилактических учреждений, научно - исследовательских лабораторий и опытно - промышленных участков, которые готовят ксенобиопротезы клапана сердца (биопротез аортального клапана свиной - БАКС) и артериальные ксенобиопротезы сосуда (АКС) для имплантации пациентам.

1.2. Ксенобиопротезы БАКС и АКС относятся к изделиям медицинского назначения, которые подлежат обязательной стерилизации перед применением.

1.3. БАКС состоит из биологической части - биополимерного клапанно - аортального комплекса (аортальный клапан свиньи), предварительно подвергнутого химической обработке, и искусственной части - функционального поддерживающего каркаса (изготовлен из полипропилена с обшивкой из полиэфирной (нити и фторопласта?).

1.4. АКС состоит из биологической части - сонной артерии крупного рогатого скота, предварительно подвергнутой химической обработке, и искусственной части - наружного укрепляющего каркаса из полотна основовязанного сетчатого медицинского (ПОСМ-3).

1.5. Стерилизацию БАКС и АКС проводят в 0,5%-ном (по активно действующему веществу - АДВ) растворе глутарового альдегида, приготовленном на фосфатном буферном растворе.

1.6. Глутаровый альдегид относится к умеренно опасным веществам при ингаляционном воздействии и попадании в желудок; обладает выраженным раздражающим действием в отношении кожных покровов и слизистых оболочек.

1.7. БАКС и АКС, подвергнутые стерилизации 0,5%-ным раствором глутарового альдегида и отмытые в соответствии с режимами, рекомендованными в настоящих "Методических указаниях" (п.п. 4.8.1. и 4.8.2.), не обладают общетоксическими и аллергенными свойствами.

1.8. Стерилизация БАКС и АКС 0,5%-ным раствором глутарового альдегида не вызывает разрушения волокнистых структур биологической части протезов, не изменяет их биомеханические характеристики.

 

2. Подготовка БАКС и АКС к стерилизации

 

2.1. Биологический материал (клапанно - аортальные комплексы свиньи и сонные артерии крупного рогатого скота) забирают на мясокомбинате после убоя животных. Артерии выделяют вместе с окружающей клетчаткой. Материал не должен быть загрязнен содержимым желудка или кишечника.

2.2. Забранный биологический материал помещают в стерильные емкости (в стерильный 0,85%-ный раствор хлорида натрия) и при температуре 4-8 град. С поставляют в учреждение - изготовитель в сроки, не превышающие четырех часов после убоя животных.

2.3. Сразу после доставки биологический материал отмывают от крови проточной питьевой водой (ГОСТ 2874-82) при температуре 12-18 град. С в течение одного - двух часов, очищают от окружающих тканей и оставляют для дальнейшего отмыва в проточной воде на 16-18 часов.

2.4. Отмытый и очищенный биологический материал подвергают химической обработке, включающей структурирование ткани. Указанную обработку проводят в соответствии с требованиями нормативно - технической документации на БАКС и АКС.

2.5. При подготовке БАКС выполняют следующие манипуляции.

2.5.1. Перед началом структурирования клапанно - аортальных комплексов створки клапана расправляют, помещая между створками и стенкой аортального синуса стерильные тампоны из ваты.

2.5.2. По окончании процесса структурирования из клапанно - аортального комплекса выкраивают необходимую для изготовления протеза часть, которую подшивают на функциональный поддерживающий каркас (п. 1.3.). Для предотвращения высыхания биологической части в процессе сборки биопротеза указанный материал погружают в стерильную емкость со стерильным 0,85%-ным раствором хлорида натрия.

2.5.3. Каркас предварительно стерилизуют 0,5%-ным раствором глутарового альдегида, приготовленным на фосфатном буферном растворе (п. 3.4.). Стерилизацию проводят в емкости из темного стекла или полипропилена в течение 10 суток при температуре 22-25 град. С.

2.5.4. К готовому БАКС (с вложенными согласно п. 2.5.1. ватными тампонами) с помощью шовного материала прикрепляют ярлык из фторопласта, на котором указывают месяц и год изготовления биопротеза.

2.6. При подготовке АКС выполняют следующие манипуляции.

2.6.1. В ходе структурирования сонных артерий перед последним этапом обработки производят дополнительную очистку артерий от разволокнившейся в процессе обработки адвентиции, перевязку коллатералей и проверку герметичности стенки сосудов. На этом же этапе для получения АКС необходимой длины сшивают два сосуда соответствующего диаметра. После этого производят замер параметров сосуда для его маркировки и приготовления соответствующего каркаса.

2.6.2. По окончании процесса структурирования на сосуд надевают каркас (п. 1.4.), сшитый с помощью шовного материала и предварительно простерилизованный паровым методом при температуре 120 град. С в течение 45 минут.

2.7. Все манипуляции, указанные в п.п. 2.5. и 2.6., производят с соблюдением правил асептики (в боксе или заменяющем его помещении, используя стерильные посуду, инструменты и шовный материал).

2.8. После сборки (п.п. 2.5.4. и 2.6.2.) ксенобиопротезы БАКС и АКС готовы к стерилизации.

 

3. Приготовление 0,5% раствора глутарового альдегида

 

3.1. 0,5%-ный (по АДВ) раствор глутарового альдегида на фосфатном буферном растворе, имеющем рН 8,2 - 8,9 (приложение 1), готовят из 25%-ного раствора глутарового альдегида, выпускаемого заводом химреактивов "Reanal" (ВНР).

3.2. Исходный раствор глутарового альдегида подлежит регулярному контролю на содержание АДВ (п. 1. прил. 2). Концентрацию глутарового альдегида в каждой емкости проверяют после вскрытия бутыли и при дальнейшем использовании не реже 1 раза в два месяца.

3.3. Расчет количества исходного раствора глутарового альдегида, необходимою для приготовления 1 куб.дм (л) рабочего (0,5%-ного) раствора, проводят по следующей формуле:

 

                                471,7

                            V = -----,

                                  K

 

где V - объем   исходного      раствора   глутарового   альдегида,

        необходимый   для    приготовления   1   куб.дм   рабочего

        раствора, куб.см (мл);

471,7 - коэффициент,  рассчитанный  с   учетом плотности исходного

        раствора глутарового альдегида.

 

3.4. Для приготовления 1 куб.дм рабочего (0,5%-ного) раствора глутарового альдегида в мерную посуду вместимостью 1 куб.дм вносят рассчитанный объем исходного раствора вещества (п. 3.3.) и доводят фосфатным буферным раствором до 1 куб.дм.

3.5. Рабочий раствор глутарового альдегида готовят и проверяют на содержание АДВ (п. 2. прил. 2) непосредственно перед использованием.

 

4. Проведение стерилизации

 

4.1. Стерилизацию БАКС проводят в широкогорлой емкости из темного стекла или полипропилена.

АКС стерилизуют надетым на стеклянный стержень (глухой дрот Л-80) с наконечником из силиконовой медицинской трубки в стеклянной пробирке (высота 500 +/- 50 мм, внутренний диаметр 17 мм) с навинчивающейся пластмассовой крышкой.

4.2. Указанные в п. 4.1. емкости (для АКС - пробирки со стеклянным стержнем внутри), закрыв ватно - марлевыми пробками, предварительно подвергают стерилизации паровым методом. Крышки к емкостям стерилизуют отдельно этим же методом при температуре 120 град. С в течение 45 минут.

4.3. Готовый ксенобиопротез (БАКС с вложенными ватными тампонами, АКС, надетый на стеклянный стержень) помещают в соответствующую стерильную емкость, которую заполняют 0,5%-ным раствором глутарового альдегида (п. 3.4.). Емкость герметично закрывают крышкой и прикрепляют этикетку с указанием даты начала и окончания стерилизации. Работу проводят в асептических условиях.

4.4. Время стерилизационной выдержки при температуре 22-25 град. С составляет: при стерилизации БАКС - 10 суток, при стерилизации АКС - 5 суток.

При стерилизации стеклянную емкость с ксенобиопротезом необходимо держать в темном месте.

4.5. Работу по стерилизации БАКС и АКС регистрируют в специальных журналах (прил. 3).

4.6. По окончании стерилизации проводят контроль стерильности ксенобиопротезов (раздел 5 настоящих "Методических указаний"). После получения заключения о стерильности испытуемой партии изделий ксенобиопротезы могут быть использованы по назначению.

4.7. Перед имплантацией БАКС или АКС пациенту наружную поверхность емкости (пробирки), содержащей ксенобиопротез, протирают с помощью стерильного пинцета (корнцанга) стерильной марлевой салфеткой, смоченной 6%-ным раствором перекиси водорода (по АДВ), и оставляют на 30 минут на стерильном подносе.

Спустя указанное время емкость открывают и осторожно, не касаясь ее краев, с помощью стерильных пинцетов извлекают ксенобиопротез (в случае АКС - стеклянный стержень с надетым на него ксенобиопротезом) из раствора глутарового альдегида.

4.8. Для удаления из изделия стерилизующего средства выполняют следующие манипуляции, строго соблюдая правила асептики.

4.8.1. При работе с БАКС из него извлекают ватные тампоны и в течение 90 минут при интенсивном помешивании ксенобиопротез отмывают в 500 куб.см стерильного 0,85%-ного раствора хлорида натрия (температура раствора 25-30 град. С) со сменой раствора каждые 15 минут.

4.8.2. При работе с АКС ксенобиопротез снимают со стержня и в течение 150 минут промывают при постоянном помешивании в 500 куб.см стерильного 0,85%-ного раствора хлорида натрия (температура раствора 25-30 град. С), 8-кратно меняя раствор через каждые 15-20 минут. Внутреннюю поверхность АКС промывают с помощью стерильного шприца.

4.8.3. Для указанных манипуляций используют стерильные широкогорлые стеклянные емкости (банки) объемом 500 куб.см, простерилизованные паровым методом.

4.8.4. БАКС и АКС, отмытые от глутарового альдегида согласно режимам, указанным соответственно в п.п. 4.8.1. и 4.8.2., готовы для имплантации.

4.9. Если отмытый, подготовленный к имплантации БАКС или АКС по каким-либо причинам не был использован, он подлежит повторной стерилизации в соответствии с п.п. 4.1. - 4.4. настоящих "Методических указаний".

4.10. В случае, когда после окончания стерилизации БАКС или АКС сразу не используют для имплантации пациентам, ксенобиопротезы оставляют, не вскрывая емкостей, погруженными в раствор глутарового альдегида, в котором проводили стерилизацию. Срок хранения изделий - один год при температуре от +4 град. С до +25 град. С.

 

5. Контроль стерильности

 

5.1. Контроль стерильности БАКС и АКС проводят бактериолог и лаборант бактериологической лаборатории учреждения - изготовителя.

5.2. Контролю на стерильность подлежит одно изделие из каждой партии, содержащей до 30 ксенобиопротезов.

Партией называется количество изделий одного наименования, одновременно заложенных на стерилизацию.

5.3. Перед проведением работы по контролю стерильности наружную поверхность емкости, содержащей БАКС или АКС, обрабатывают как указано в п.4.7. Емкость открывают и ксенобиопротез стерильными пинцетами извлекают из раствора глутарового альдегида.

5.4. Удаление стерилизующего средства с изделия производят следующим образом.

5.4.1. Из БАКС с помощью стерильных пинцетов извлекают ватные тампоны и ксенобиопротез переносят для нейтрализации остатков глутарового альдегида в стерильную широкогорлую емкость (банку), содержащую 500 куб.см стерильного 2%-ного раствора пиросернистокислого натрия (метабисульфит натрия, ТУ 6-09-4377-78). Изделие выдерживают в растворе нейтрализатора в течение 15 минут, после чего перекладывают в стерильную емкость, содержащую 500 куб.см стерильной питьевой воды (ГОСТ 2874-82), и оставляют в ней для отмывания нейтрализующего раствора также на 15 минут.

5.4.2. В случае АКС выполняют аналогичные манипуляции, не снимая ксенобиопротез со стержня. Из раствора глутарового альдегида стержень с АКС переносят в пустую стерильную пробирку (п. 4.1.) и заливают в нее стерильный 2%-ный раствор пиросернистокислого натрия. Через 15 минут стержень с АКС переносят в другую стерильную пробирку и заливают стерильной питьевой водой. По истечении 15 минут АКС извлекают из воды и снимают со стержня.

5.5. Раствор нейтрализатора - 2%-ный раствор пиросернистокислого натрия - готовят путем растворения 20 г вещества в 980 куб.см дистиллированной воды (ГОСТ 6709-72) и стерилизуют паровым методом при 120 град. С в течение 45 минут.

5.6. Отмытый БАКС или АКС стерильными пинцетами перекладывают в стерильную чашку Петри и с помощью стерильных ножниц и пинцета разрезают на 4-6 равноценных частей таким образом, чтобы каждая часть содержала биологическую ткань и элементы каркаса.

5.7. Посев на стерильность производят, помещая кусочки ксенобиопротеза в широкогорлые пробирки с 30 куб.см тиогликолевой среды.

Посевы выдерживают в термостате при температуре 30 град. С в течение 14 суток.

5.8. Результаты бактериологического контроля фиксируют в журналах (прил. 3).

При отсутствии роста микроорганизмов во всех пробирках по истечении 14 суток делают заключение о стерильности изделия.

5.9. Мероприятия, обеспечивающие асептические условия при посевах (подготовка бокса, инструментов и персонала к работе), а также способ приготовления и правила контроля стерильности питательной среды, используемой при контроле стерильности ксенобиопротезов, осуществляют согласно "Методическим рекомендациям по контролю стерильности изделий медицинского назначения" (приложение N 6 к приказу Минздрава СССР N 60 от 17.01.79 г. "О мерах по дальнейшему укреплению и развитию дезинфекционного дела").

 

6. Меры предосторожности

 

6.1. Безопасность использования растворов глутарового альдегида для больных и персонала гарантируется соблюдением мер предосторожности.

6.2. К работе допускают лиц, прошедших соответствующий инструктаж по производственным обязанностям, технике безопасности и мерам предосторожности при работе с глутаровым альдегидом.

Лиц моложе 18 лет, беременных и кормящих женщин к работе с глутаровым альдегидом не допускают.

6.3. Работающий с глутаровым альдегидом персонал проходит предварительный и периодические (раз в год) медицинские осмотры.

6.4. Приготовление 0,5%-ного раствора глутарового альдегида производят в вытяжном шкафу или в хорошо проветриваемом помещении.

6.5. Всю работу с глутаровым альдегидом следует проводить в резиновых перчатках, а при работе с концентрированными (25%-ными) растворами использовать защитные очки или защитные маски из прозрачных полимерных материалов.

6.6. Необходимо точно выполнять все этапы отмывания глутарового альдегида с ксенобиопротеза (п. 4.8.), обеспечивая максимальное удаление остатков глутарового альдегида с изделия.

6.7. Запасы 25%-ного раствора глутарового альдегида хранят в местах, недоступных для общего пользования, отдельно от лечебных препаратов, в плотно закрытой посуде темного стекла в темном, холодном месте.

6.8. Все емкости с растворами глутарового альдегида должны иметь этикетки с указанием названия и концентрации.

 

Примечание: При создании новых видов ксенобиопротезов, а также при замене материалов в изделиях, указанных в данных "Методических указаниях", требуется дополнительное согласование режимов стерилизации с Всесоюзным НИИ дезинфекции и стерилизации и разрешение Минздрава СССР на их применение.

 

 

 

 

Приложение N 1

 

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ФОСФАТНОГО БУФЕРНОГО РАСТВОРА

 

Для приготовления фосфатного буферного раствора (рН 8,2-8,9) смешивают 1 куб.дм 0,067 М раствора двузамещенного фосфорнокислого натрия (раствор 1) с 20 куб.см 0,067 М раствора однозамещенного фосфорнокислого калия (раствор 2). Раствор буфера готовят непосредственно перед использованием.

Растворы исходных компонентов готовят в мерной посуде.

Раствор 1 получают путем растворения 23,87 г двузамещенного фосфорнокислого натрия (ГОСТ 4172-76) в дистиллированной воде (ГОСТ 6709-72) с доведением объема до 1 куб.дм.

Раствор 2 получают путем растворения 0,91 г однозамещенного фосфорнокислого калия (ГОСТ 4198-75) в дистиллированной воде (ГОСТ 6709-72) с доведением объема до 100 куб. см.

 

 

 

 

Приложение N 2

 

МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЛУТАРОВОГО АЛЬДЕГИДА

 

1. Анализ концентрированных (25%-ных) растворов.

К навеске около 0,1 г испытуемого раствора глутарового альдегида, взятой с точностью до 0,0002 г, прибавляют 5 куб.см 2%-ного раствора пиросернистокислого натрия (ТУ 6-09-4377-78) и после взбалтывания оставляют на 5-7 минут. По истечении указанного времени титруют 0,1 н раствором йода до появления устойчивой желтой окраски. В качестве контроля аналогичным образом проводят титрование 5 куб. см 2%-ного раствора пиросернистокислого натрия без глутарового альдегида.

0,1 н раствор йода в дистиллированной воде готовят в мерной посуде с использованием фиксаналов. Срок хранения готового раствора не более двух месяцев.

Концентрацию глутарового альдегида определяют по формуле:

 

                      0,0025 х (V1 - V2) х 100

                  К = ------------------------,

                                 m

 

где  К - содержание глутарового альдегида, % ;

0,0025 - количество граммов глутарового альдегида, соответствующее

         1 куб.см 0,1 н раствора йода;

    V1 - объем   точно  0,1  н  раствора йода,  израсходованный на

         титрование контроля, куб. см;

    V2 - объем   точно  0,1  н  раствора йода,  израсходованный на

         титрование анализируемого образца глутарового  альдегида,

         куб см;

    m - масса анализируемого образца глутарового альдегида, г.

 

2. Анализ разбавленных (0,5%-ных) растворов.

Количественное определение глутарового альдегида в разбавленных растворах глутарового альдегида проводят по методике, аналогичной указанной выше (см. п. 1. приложения 2), однако навеску анализируемого образца увеличивают до 7-8 г и взвешивание проводят с точностью до 0,01 г. Контролем служат 5 куб.см раствора пиросернистокислого натрия, к которому добавляют дистиллированную воду в количестве, равном объему навески глутарового альдегида.

Концентрацию глутарового альдегида определяют по той же формуле, что и в случае концентрированных растворов (см. п. 1. прил. 2), подставляя в формулу значения V1, V2 и m, определенные при анализе разбавленного раствора.

 

 

 

 

Приложение N 3

 

ФОРМА ВЕДЕНИЯ ЖУРНАЛА РЕГИСТРАЦИИ РАБОТ ПО

СТЕРИЛИЗАЦИИ КСЕНОБИОПРОТЕЗОВ (БАКС ИЛИ АКС)

 

N партии

Дата нача- ла  стери- лизации

Дата окон- чания сте- рилизации

Дата бак- териологи- ческого   контроля

Результат ба- териологичес- кого контроля

Подпись лица,   прово-  дившего стерили- зацию