МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР
ПРИКАЗ
23 декабря 1967 г.
N 980
В соответствии с представлением
Управления по внедрению новых лекарственных средств и медицинской техники и
Главного управления лечебно-профилактической помощи детям и матерям приказываю:
1. Внедрить в практику
лечебно-профилактических учреждений экспресс-метод определения резус-фактора,
одобренный Комитетом по новой медицинской технике.
2. Министрам здравоохранения союзных и
автономных республик, заведующим краевыми и областными отделами
здравоохранения:
а) организовать силами и средствами
службы крови заготовку универсальной [AB(IV) группы крови] сыворотки антирезус
для приготовления тестового реактива по определению резус-фактора на плоскости;
б) обязать директоров республиканских
институтов гематологии и переливания крови, главных врачей республиканских,
краевых, областных и городских станций переливания крови, а также заведующих
крупными (категорированными) отделениями переливания крови:
- обеспечить бесперебойное снабжение
лечебно-профилактических учреждений на обслуживаемой территории универсальной
сывороткой для определения резус-фактора на плоскости, руководствуясь
инструкцией по приготовлению сывороток для определения резус-фактора на
плоскости без подогрева (приложение N 1);
- организовать инструктаж врачей
лечебно-профилактических учреждений по применению экспресс-метода определения
резус-фактора на плоскости и установить контроль за
использованием противорезусных сывороток;
в) обязать главных врачей
лечебно-профилактических учреждений в течение 1968 года внедрить экспресс-метод
определения резус-фактора на плоскости согласно инструкции по применению
экспресс-метода (приложение N 2).
Б.ПЕТРОВСКИЙ
Приложение N 1
к приказу Министра
здравоохранения СССР
от 23 декабря 1967 г. N 980
ИНСТРУКЦИЯ <*>
ПО ПРИГОТОВЛЕНИЮ СЫВОРОТОК АНТИ-РЕЗУС ДЛЯ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-ФАКТОРА ЭКСПРЕСС-МЕТОДОМ НА
ПЛОСКОСТИ БЕЗ ПОДОГРЕВА
--------------------------------
<*> Разработана
в иммуногематологической лаборатории ЦОЛИПК.
Специальное
оснащение и реактивы:
1. Сыворотки анти-резус группы AB(IV) с
титром неполных антител не ниже 1:32.
2. Стандартные изогемагглютинирующие
сыворотки AB(IV).
3. Образцы свежей резус-положительной и
резус-отрицательной крови, взятой на гепарине.
4. Альбумин, полученный из плазмы человека,
или полиглюкин.
5. Гепарин "Гедеон Рихтер".
6. Физиологический раствор.
7. Центрифужные пробирки.
8. Тарелки.
9. Стеклянные палочки.
Определение резус-фактора на плоскости
без подогрева достигается путем добавления к сыворотке анти-резус альбумина или
полиглюкина, в присутствии которых сыворотки с неполными антителами приобретают
способность агглютинировать резус-положительные эритроциты.
I. ПРИГОТОВЛЕНИЕ
ТЕСТОВЫХ СЫВОРОТОК АНТИ-РЕЗУС С
ПРИМЕНЕНИЕМ АЛЬБУМИНА
Определение оптимальных соотношений сыворотки
анти-резус и раствора альбумина.
1. В штатив устанавливают 9
пронумерованных пробирок. В первую пробирку вносят пипеткой одну каплю 20%
раствора альбумина в физиологическом растворе, во вторую - 2 капли, в третью -
3 капли и т.д.
2. В каждую пробирку добавляют по одной
капле сыворотки анти-резус и содержимое пробирок тщательно перемешивают.
3. Из каждой пробирки по одной капле
смеси сыворотки с альбумином переносят на тарелку, располагая в два ряда.
4. В капли верхнего ряда той же пипеткой
вносят по одной капле свежей цельной резус-положительной крови, взятой на
гепарине (1 капля гепарина на 5 мл крови). В нижний ряд соответственно вносят
по 1 капле резус-отрицательной крови. Смесь перемешивают стеклянной палочкой,
затем тарелку периодически покачивают в течение 3 минут.
5. В каждую каплю верхнего и нижнего ряда
по истечении 3 минут добавляют по 1 капле физиологического раствора. Тарелку
снова покачивают, пока кровь не перемешается с физиологическим раствором.
Результат учитывают через 5 минут с момента перемешивания сыворотки с кровью.
Трактовка
результатов
Четкая агглютинация в капле верхнего ряда
и отсутствие агглютинации в соответствующей капле нижнего ряда указывают на
оптимальное соотношение альбумина и используемой сыворотки анти-резус.
Выбранные соотношения применяют для
приготовления тестовой сыворотки анти-резус в необходимых объемах. К
приготовленной сыворотке добавляют гепарин из расчета 1-2 капли на 10 мл
сыворотки.
Примечание: 1. На 100 мл альбумина
добавляют 2 гр. борной кислоты.
2. Концентрация исходного раствора
альбумина может варьировать:
а) если агглютинация резус-положительных
эритроцитов не достаточно сильно выражена или медленно появляется (к 5 мин.),
то концентрацию альбумина в растворе следует увеличить до 25-30%;
б) если в капле, где должна быть
отрицательная реакция, имеется неспецифическая агглютинация, то концентрацию
альбумина в растворе следует понизить до 15%.
Приготовленную тестовую сыворотку
анти-резус необходимо тщательно проверить по нескольким образцам стандартных
резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов.
II. ПРИГОТОВЛЕНИЕ
ТЕСТОВЫХ СЫВОРОТОК АНТИ-РЕЗУС С
ПРИМЕНЕНИЕМ ПОЛИГЛЮКИНА
Ввиду того, что сыворотки анти-резус в
комбинации с полиглюкином обладают способностью неспецифически агглютинировать
эритроциты, их необходимо перед добавлением полиглюкина разводить специально
подобранными изогемагглютинирующими сыворотками AB(IV).
1. Выбор изогемагглютинирующей сыворотки
для разведения сыворотки анти-резус:
а) в штатив помещают 5-10 пронумерованных
пробирок. В первую пробирку вносят 2 капли изогемагглютинирующей сыворотки
группы AB(IV) одной серии, во вторую - 2 капли другой серии и т.д.
б) в каждую пробирку добавляют по 1 капле
18% раствора полиглюкина. Содержимое пробирок тщательно
перемешивают;
в) из каждой пробирки переносят на
тарелку по 1 капле смеси сыворотки с полигклюкином и рядом помещают по одной
капле свежей крови, взятой на гепарине;
г) капли перемешивают стеклянной
палочкой; тарелку периодически покачивают в течение 5 минут, после чего выбирают
сыворотку, которая в смеси с полиглюкином не вызывает неспецифической
агглютинации эритроцитов в течение 3-4 минут.
2. Определение оптимального разведения
сыворотки анти-резус, отобранной изогемагглютинирующей сывороткой AB(IV):
а) в штатив устанавливают 9
пронумерованных пробирок. В первую пробирку вносят пипеткой одну каплю
отобранной изогемагглютинирующей сыворотки, во вторую - 2, в третью - 3 и т.д.;
б) в каждую пробирку добавляют по одной
капле сыворотки анти-резус и содержимое пробирок тщательно перемешивают;
в) начиная со второй пробирки, отсасывают
содержимое с таким расчетом, чтобы в каждой из них осталось по 2 капли
приготовленной смеси сывороток;
г) в каждую пробирку добавляют по 1 капле
18% раствора полиглюкина и перемешивают его с сывороткой.
д) из каждой пробирки по одной капле
приготовленной смеси сыворотки и полиглюкина переносят на тарелку, располагая в
два ряда;
е) в капли верхнего ряда вносят по 1
капле свежей цельной резус-положительной крови, взятой на гепарине. В нижний
ряд соответственно вносят по 1 капле резус-отрицательной крови. Смесь
перемешивают стеклянной палочкой; тарелку периодически покачивают в течение 3
минут;
ж) в каждую каплю верхнего и нижнего ряда
по истечении 3-4 минут добавляют по 1 капле физиологического раствора. Тарелку
снова покачивают, пока кровь не перемешается с физиологическим раствором.
Результат учитывают через 5 минут с момента перемешивания сыворотки с кровью.
Четкая агглютинация в капле верхнего ряда
и отсутствие агглютинации в соответствующей капле нижнего ряда указывают на
оптимальное разведение сыворотки анти-резус изогемагглютинирующей сывороткой.
Выбранное соотношение используют для
приготовления тестовой сыворотки анти-резус в необходимых объемах. К
приготовленной сыворотке добавляют гепарин из расчета 1-2 капли на 10 мл
сыворотки.
3. Освобождение тестовой сыворотки
анти-резус от хлопьев, выпадающих при добавлении полиглюкина:
а) тестовую сыворотку оставляют в
холодильнике на 2 суток при температуре 4-8 град. C.
б) выпавшие в тестовой сыворотке хлопья отделяют
центрифугированием при 3000-5000 об/мин. в течение 15-20 мин.;
в) прозрачную часть сыворотки отсасывают
и пропускают через бумажный фильтр;
г) приготовленную тестовую сыворотку
проверяют по нескольким образцам стандартных резус-положительных и резус-отрицательных
эритроцитов.
Примечание. 1. Необходимая концентрация
полиглюкина достигается выпариванием 6% раствора до 1/3 его первоначального
объема. На 100 мл приготовленного 18% полиглюкина добавляют 4 г борной кислоты.
2. Соотношение полиглюкина и сыворотки
может варьировать. Если агглютинация резус-положительных эритроцитов
недостаточно сильная или медленно появляется (к 5 мин.), следует на 5 объемов
сыворотки анти-резус добавить 3 объема 18% полиглюкина.
III. ПРИГОТОВЛЕНИЕ
КОНТРОЛЬНОЙ СЫВОРОТКИ
При каждом определении резус-принадлежности
крови необходимо параллельно проводить контрольное исследование на
специфичность.
Контрольную сыворотку готовят из
изогемагглютинирующей сыворотки группы AB(IV) с добавлением к ней альбумина или
полиглюкина в тех же соотношениях, которые были использованы для приготовления
тестовой сыворотки анти-резус.
При применении полиглюкина контрольную
сыворотку готовят из изогемагглютинирующей сыворотки, которую использовали для
разведения сыворотки анти-резус.
Агглютинация эритроцитов в капле
контрольной сыворотки должна отсутствовать во всех случаях,
IV. ОБЩИЕ ЗАМЕЧАНИЯ
1. При определении резус-фактора
тестовыми сыворотками анти-резус, приготовленными в сочетании с альбумином или
полиглюкином, необходимо одновременно проводить контрольное исследование на
специфичность реакции.
2. В капле контрольной сыворотки
агглютинация эритроцитов должна отсутствовать. Если же в контрольной капле
имеется агглютинация эритроцитов, то это следует отнести за счет
неспецифичности исследуемого образца крови, что наблюдается у некоторых больных
и может привести к неправильной трактовке результатов. В таких случаях
заключение о резус-принадлежности крови не может быть
выдано, и больным переливают резус-отрицательную кровь.
3. Определять резус-фактор можно при
температуре 15-35 град. C.
4. Срок годности тестовых и контрольных
сывороток от 3 до 6 месяцев при хранении в холодильнике (4-6 град. C).
5. Тестовые сыворотки контролируются не
реже 2 раз в месяц лабораторией, где они изготовлены.
Начальник Главного управления
лечебно-профилактической
помощи детям и матерям
Л.СКОРНЯКОВА
Приложение N 2
к приказу Министра
здравоохранения СССР
от 23 декабря 1967 г. N 980
ИНСТРУКЦИЯ <*>
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ РЕЗУС-ФАКТОРА ЭКСПРЕСС-МЕТОДОМ
НА ПЛОСКОСТИ
ПРИ КОМНАТНОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ С ПОМОЩЬЮ СЫВОРОТОК,
ПРИГОТОВЛЕННЫХ НА АЛЬБУМИНЕ ИЛИ
ПОЛИГЛЮКИНЕ
--------------------------------
<*> Разработана
в иммуногематологической лаборатории ЦОЛИПК.
Оснащение: сыворотка анти-резус
универсальная - AB(IV), контрольная сыворотка, физиологический раствор,
тарелки, стеклянные палочки.
Кровь для реакции берут из пальца
непосредственно перед определением. Можно использовать также свежие (не более
2-х дневного хранения при +4 град. C) эритроциты, взятые со дна пробирки после
центрифугирования или отстаивания от плазмы с консервантом.
Техника определения: на тарелку слева
наносят одну каплю сыворотки анти-резус и справа - одну каплю контрольной
сыворотки. Рядом с этими каплями помещают по одной капле крови в количестве 1/2
от объема взятой сыворотки. Стеклянной палочкой перемешивают кровь с сыворотками
и размазывают на тарелке до получения тонкого слоя. После этого тарелку
периодически покачивают. Через 3-4 мин. в обе капли необходимо добавить по
одной капле физиологического раствора для снятия возможной неспецифической
агглютинации и продолжать наблюдение при покачивании тарелки до истечения 5
мин., после чего учитывают результат.
Оценка результатов: При положительном
результате агглютинация наблюдается только в одной капле - слева, с сывороткой
анти-резус. При отрицательном результате агглютинация отсутствует в обоих
каплях, и они остаются равномерно окрашенными (см. рис. стр. 8 - не
приводится).
Агрегацию эритроцитов в зоне подсыхания
по периферии капли не учитывают!
Начальник Главного управления
лечебно-профилактической помощи
детям и матерям
Л.СКОРНЯКОВА