"Измерение массовой концентрации формальдегида, ацетальдегида, пропионового альдегида, масляного альдегида и ацетона в пробах крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания. МУК 4.1.2111-06" // Портал о здоровье, заболеваниях и лечении, о лекарствах, о докторах и больницах.

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной

службы по надзору в сфере

защиты прав потребителей

и благополучия человека,

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

9 августа 2006 года

Дата введения:

1 сентября 2006 года

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ИЗМЕРЕНИЕ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ ФОРМАЛЬДЕГИДА,

АЦЕТАЛЬДЕГИДА, ПРОПИОНОВОГО АЛЬДЕГИДА, МАСЛЯНОГО АЛЬДЕГИДА

И АЦЕТОНА В ПРОБАХ КРОВИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ

ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.1.2111-06

1. Область применения

Методические указания по определению концентрации алифатических альдегидов и ацетона в крови предназначены для использования Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, работающими в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды.

Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием альдегидов и ацетона в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 "ГСОЕИ. Методики выполнения измерений", ГОСТ Р 1.5-92 "ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов".

Методика выполнения измерений обеспечивает определение альдегидов в крови в диапазоне концентраций 0,001-0,100 мкг/куб. см, ацетона - 0,01-2,00 мкг/куб. см с погрешностью, не превышающей 26,5%, - для формальдегида, 14,2% - для ацетальдегида, 21,7% - для ацетона, 24,3% - для пропионового альдегида, 23,8% - для масляного альдегида, при доверительной вероятности Р = 0,95.

Формальдегид (HCHO) Молекулярная масса 30,03.

Формальдегид (муравьиный альдегид, метаналь) - бесцветный газ с резким раздражающим запахом. Температура кипения: -19,2 град. С, плотность: 0,8153 г/куб. см. Хорошо растворим в воде, спиртах и других полярных растворителях. При низких температурах смешивается с неполярными растворителями (толуолом, диэтиловым эфиром, этилацетатом) [5]. Обладает раздражающим, сенсибилизирующим и кожно-резорбтивным действием, оказывает гепатотропный эффект, относится к веществам, обусловливающим канцерогенную опасность [3].

Ацетальдегид (CH3CHO) Молекулярная масса 44,05.

Ацетальдегид (уксусный альдегид) - бесцветная жидкость с удушающим запахом. Температура кипения: 20,16 град. С, плотность: 0,778 г/куб. см. Смешивается во всех соотношениях с водой и большинством органических растворителей [1]. Оказывает наркотическое, раздражающее, мутагенное и канцерогенное действие [3].

Пропионовый альдегид (CH3CH2CHO) Молекулярная масса 58,08.

Пропионовый альдегид (пропаналь) - бесцветная жидкость с характерным запахом. Температура кипения: 48,8 град. С, плотность: 0,8058 г/куб. см. Растворим в воде, смешивается со многими органическими растворителями [4]. Оказывает наркотическое действие, вызывает изменения со стороны дыхательной системы, паренхиматозных органов, угнетает гемопоэз [3].

Масляный альдегид (CH3(CH2)2CHO) Молекулярная масса 72,11.

Масляный альдегид (бутаналь) - бесцветная прозрачная жидкость с резким запахом. Температура кипения: 75,7 град. С, плотность: 0,817 г/куб. см [2]. Растворим в воде, смешивается со многими органическими растворителями. Оказывает наркотическое, раздражающее и кожно-резорбтивное действие [3].

Ацетон (CH3COCH3) Молекулярная масса 58,08.

Ацетон (диметилкетон) - летучая бесцветная жидкость с характерным запахом. Температура кипения: 56,1 град. С, плотность: 0,792 г/куб. см [1]. Смешивается с водой и органическими растворителями (эфиром, хлороформом, бензолом, четыреххлористым углеродом). Обладает наркотическим и кожно-резорбтивным действием, угнетает репродуктивную функцию. Преимущественно действует на центральную нервную систему [3].

2. Сущность метода

Методика основана на предварительном переводе альдегидов и ацетона в производные 2,4-динитрофенилгидразина, концентрировании продуктов дериватизации из биологического материала экстракцией гексаном, высушивании гексанового экстракта, растворении высушенного остатка в ацетонитриле и анализе на жидкостном хроматографе.

Измерение концентрации альдегидов и ацетона выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием УФ-детектора.

Измерению не мешают спирты, органические кислоты, кетоны и другие альдегиды.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства,

материалы, растворы и реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы:

3.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф "Милихром-4" с

ультрафиолетовым детектором

Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические ГОСТ 24104-01

Гири Г2-210 ГОСТ 7328-01

Термометр стеклянный ГОСТ 28498-90

Микрошприцы МШ-10 ТУ 2.833.106-00

Цилиндр мерный вместимостью 50 куб. см ГОСТ 1770-74

Пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5 куб. см ГОСТ 29227-91

Колбы мерные вместимостью 5, 100, 200, 500 ГОСТ 1770-74

и 1000 куб. см

Редуктор кислородный ТУ 26-05-236-73

Стандартные образцы:

Формальдегид в воде с концентрацией 1,0 мг/куб. см ГСО 7347-96.

3.2. Вспомогательные устройства

Колонка металлическая длиной 8 см и

внутренним диаметром 2 мм, заполненная

сорбентом Диасорб С16 зернением 5-6-7 мкм

Центрифуга ЦЛМН-Р10-01-"Элекон" ТУ 9443-001-245.23530-97

Дистиллятор ТУ 61-1-721-79

Сушильный шкаф ШСС-80 П УХЛ 4.2 ТУ 16.531.743-83

Дефлегматор длиной 300 мм ГОСТ 25336-82

Холодильник шариковый ХШ-300 (6 шар.) ГОСТ 1770-74

Холодильник прямой ХПТ-3-300 ГОСТ 1770-74

Воронка Шотта (пор 16) ГОСТ 25336-82

Воронки делительные вместимостью 250 куб. см ГОСТ 23932-90

Бюксы СВ 19/9 ТУ 92-891.029-91

Пробирки центрифужные пропиленовые с

завинчивающейся крышкой вместимостью

15 куб. см, пр-во "Sarstedt" (Германия)

Колбы для перегонки круглодонные ГОСТ 8682-93

вместимостью 1,0; 2,0 куб. дм

Стакан термостойкий вместимостью 2 куб. дм ГОСТ 23932-90.

3.3. Реактивы

Гексан для хроматографии, осч ТУ 6-09-4521-77

Ацетонитрил для жидкостной хроматографии, осч ТУ 6-09-14-2167-84

Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72

Ацетальдегид, чда ТУ 6-09-3844-74

Пропионовый альдегид, чда ТУ 6-09-08-1637-83

Масляный альдегид, чда ТУ 6-09-08-1885-86

Ацетон, осч (чистота не менее 99,75) ТУ 2633-039-44493179-00

2,4-Динитрофенилгидразин (2,4-ДНФГ), ч ТУ 6-09-2394-77

2,4-Динитрофенилгидразон формальдегида,

перекристаллизованный из очищенного

этанола, чистота не менее 99,0%

2,4-Динитрофенилгидразон ацетальдегида,

перекристаллизованный из очищенного

этанола, чистота не менее 99,0%

2,4-Динитрофенилгидразон пропионового

альдегида, перекристаллизованный из

очищенного этанола, чистота не менее 99,0%

2,4-Динитрофенилгидразон масляного альдегида,

перекристаллизованный из очищенного

этанола, чистота не менее 99,0%

2,4-Динитрофенилгидразон ацетона,

перекристаллизованный из очищенного

этанола, чистота не менее 99,0%

Кислота хлористоводородная (плотность 1,19), хч ГОСТ 3118-77

Перманганат калия, ч ГОСТ 20490-75

Спирт этиловый, очищенный от альдегидов и ГОСТ Р 51652-00

кетонов кипячением с 2,4-динитрофенилгидразином,

перегнанный

Калий двухромовокислый, чда ГОСТ 4220-75

Серная кислота ГОСТ 4204-77

Кислота уксусная, хч ГОСТ 61-75

Диэтиламин, ч, перегнанный для хроматографии ТУ 6-09-68-89

Раствор гепарина в ампулах

(5000 ед. в 1 куб. см).

3.4. Материалы

Гелий газообразный ТУ 51-940-80.

3.5. Растворы

Хромовая смесь

Элюент для хроматографии

2 М водный раствор хлористоводородной кислоты

0,2%-й раствор 2,4-динитрофенилгидразина

в 2 М хлористоводородной кислоте

Исходный раствор альдегидов для калибровки

Исходный раствор ацетона для калибровки.

Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования, химреактивов и материалов, по метрологическим и техническим характеристикам не уступающих перечисленным.

4. Требования к безопасности

4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности по ГОСТ 12.1.007-88 и 12.1.005-88.

4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79, противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и меры безопасности, указанные в "Руководстве по правилам эксплуатации прибора".

5. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

6. Условия измерений

6.1. При подготовке проб к анализу и приготовлении растворов соблюдают следующие условия:

- температура воздуха 15-25 град. С;

- атмосферное давление 630-800 мм рт. ст.;

- влажность воздуха не более 80% при температуре 25 град. С.

6.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды и растворителей, приготовление растворов, подготовка хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка посуды

Используемую посуду замочить на 1 ч в хромовой смеси, промыть проточной водопроводной водой, ополоснуть дистиллированной водой и просушить при температуре 120 град. С.

7.2. Подготовка растворителей

7.2.1. Очистка ацетонитрила от примесей. В колбу вместимостью 2 куб. дм помещают 1 куб. дм ацетонитрила и 20 г KMnO4, кипятят с шариковым холодильником в течение 1 ч, затем перегоняют с дефлегматором при температуре 81,6 град. С, отбирая фракции по 200 куб. см. Когда в колбе останется около 200 куб. см продукта, перегонку прекращают. Остаток можно смешивать с новой порцией растворителя. Первую фракцию (200 куб. см) отбрасывают, а остальные проверяют на поглощение в УФ-области (оптическая плотность при 200 нм не должна превышать 0,05 о.е./см).

7.2.2. Очистка диэтиламина от примесей. В колбу вместимостью 1,0 куб. дм помещают 0,5 куб. дм диэтиламина и перегоняют с прямым холодильником. Первые и последние порции (50 куб. см) отбрасывают, оставляют среднюю порцию. Перегнанный раствор должен быть бесцветным.

7.2.3. Очистка этилового спирта от альдегидов и кетонов. К 1 куб. дм 96%-го спирта добавляют 2 г 2,4-динитрофенилгидразина, 0,5 куб. см концентрированной хлористоводородной кислоты и кипятят с шариковым холодильником 1 ч. Перегоняют с дефлегматором в приборе со стеклянными шлифами, отбрасывая первые и последние 100 куб. см, после этого отгоняют вторично.

7.3. Приготовление растворов

7.3.1. Хромовая смесь. В термостойкий стакан вместимостью 2 куб. дм насыпают 50 г хромовокислого калия, осторожно приливают по палочке частями, тщательно перемешивая, 1 куб. дм концентрированной серной кислоты.

7.3.2. Элюент для хроматографии. 60 куб. см ацетонитрила смешивают с 40 куб. см дистиллированной воды. Подвижную фазу фильтруют через воронку Шотта (пор 16) и дегазируют барботированием гелия в течение 5 мин. со скоростью 50 - 60 куб. см/мин. Затем добавляют 2,5% уксусной кислоты и 1% диэтиламина (объемных %).

7.3.3. Хлористоводородная кислота, 2 моль/куб. дм. В мерную колбу вместимостью 1 куб. дм, наполненную до половины объема дистиллированной водой, прибавляют 61,0 куб. см концентрированной хлористоводородной кислоты (плотность 1,19 г/куб. см), доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

7.3.4. 2,4-Динитрофенилгидразин, 0,2%-й раствор в 2 М хлористоводородной кислоте. В мерную колбу на 100 куб. см вносят 0,2 г 2,4-динитрофенилгидразина и доводят до метки 2 М раствором хлористоводородной кислоты.

7.3.5. Исходный раствор альдегидов для калибровки (раствор А). В мерную колбу объемом 500 куб. см, содержащую дистиллированную воду, в которую предварительно добавляют 5 куб. см 0,2%-го раствора 2,4-динитрофенилгидразина, переносят 4 куб. см ГСО формальдегида с концентрацией 1,0 мг/куб. см (4,0 мг), 5,0 куб. мм (3,9 мг) ацетальдегида, 5,0 куб. мм (4,03 мг) пропионового альдегида, 5,0 куб. мм (4,08 мг) масляного альдегида и доводят водой до метки. Стандартные растворы готовят с предварительным охлаждением альдегидов и дистиллированной воды. Срок хранения - 8 ч. Содержание альдегидов в растворе А составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): формальдегида - 8,0 мкг/куб. см; ацетальдегида - 7,8 мкг/куб. см; пропионового альдегида - 8,1 мкг/куб. см; масляного альдегида - 8,2 мкг/куб. см.

Исходный раствор ацетона для калибровки (раствор В). В мерную колбу объемом 200 куб. см, содержащую дистиллированную воду, в которую предварительно добавляют 5 куб. см 0,2%-го раствора 2,4-динитрофенилгидразина, переносят 5,0 куб. мм (3,96 мг) ацетона и доводят водой до метки. Срок хранения раствора - 8 ч. Содержание ацетона в растворе В составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества) 19,8 мкг/куб. см.

7.3.6. Получение 2,4-динитрофенилгидразонов формальдегида, ацетальдегида, пропионового и масляного альдегидов и ацетона (используются для идентификации гидразонов альдегидов и ацетона в анализируемых пробах). Эквимолярные количества 2,4-ДНФГ и анализируемого вещества кипятят в очищенном от альдегидов и кетонов этаноле в течение 1 ч в присутствии каталитических количеств хлористоводородной кислоты. Выпавший в осадок 2,4-динитрофенилгидразон соответствующего альдегида (ацетона) отфильтровывают и перекристаллизовывают из этанола до постоянной температуры плавления.

7.4. Подготовка хроматографической колонки

Колонку устанавливают на хроматограф и подают элюирующую жидкость, подготовленную в соответствии с п. 7.3.2., со скоростью 100 куб. мм/мин. до установления равновесия колонки, которое определяют по стабильности нулевой линии детектора.

7.5. Установление градуировочной характеристики

7.5.1. Строят две зависимости площади хроматографического пика от концентрации альдегидов и ацетона в крови в диапазонах 0,001-0,010 мкг/куб. см и 0,01-0,10 мкг/куб. см - для альдегидов, 0,01-0,10 мкг/куб. см и 0,1-2,0 мкг/куб. см - для ацетона. Градуировочные характеристики устанавливают по пяти сериям растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из пяти растворов, готовят из растворов А и В.

7.5.2. Для приготовления градуировочных смесей отбирается проба крови объемом не менее 60 куб. см. В соответствии с п. 8 проводят анализ пробы крови на содержание альдегидов и ацетона. При наличии анализируемых веществ в холостой пробе вычитают их фоновое содержание при построении калибровки.

7.5.3. Градуировочные растворы готовят в мерных колбах объемом 5 куб. см. Для этого в каждую колбу вносят растворы А и В в соответствии с табл. 1 и 2, прибавляют 0,05 куб. см раствора гепарина, доводят объем до метки цельной кровью и перемешивают. Анализируют свежеприготовленные растворы.

Таблица 1

РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ

ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ В КРОВИ АЛЬДЕГИДОВ В ДИАПАЗОНЕ

КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,001 - 0,010 МКГ/КУБ. СМ И АЦЕТОНА

В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,01 - 0,10 МКГ/КУБ. СМ

Номер раствора	1	2	3	4	5
Объем раствора А, куб. мм	0,6	1,2	2,5	4,5	6,5
Массовая концентрация формальдегида, мкг/куб. см	0,001	0,002	0,004	0,007	0,010
Массовая концентрация ацетальдегида, мкг/куб. см	0,001	0,002	0,004	0,007	0,010
Массовая концентрация пропионового альдегида, мкг/куб. см	0,001	0,002	0,004	0,007	0,010
Массовая концентрация масляного альдегида, мкг/куб. см	0,001	0,002	0,004	0,007	0,010
Объем раствора В, куб. мм	2,5	5,0	10,0	17,5	25,0
Массовая концентрация ацетона, мкг/куб. см	0,01	0,02	0,04	0,07	0,10

Таблица 2

РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ

ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ В КРОВИ АЛЬДЕГИДОВ В ДИАПАЗОНЕ

КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,01 - 0,10 МКГ/КУБ. СМ И АЦЕТОНА

В ДИАПАЗОНЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ 0,1 - 2,0 МКГ/КУБ. СМ

Номер раствора	1	2	3	4	5
Объем раствора А, куб. мм	6,0	12,5	25,0	44,0	63,0
Массовая концентрация формальдегида, мкг/куб. см	0,01	0,02	0,04	0,07	0,10
Массовая концентрация ацетальдегида, мкг/куб. см	0,01	0,02	0,04	0,07	0,10
Массовая концентрация пропионового альдегида, мкг/куб. см	0,01	0,02	0,04	0,07	0,10
Массовая концентрация масляного альдегида, мкг/куб. см	0,01	0,02	0,04	0,07	0,10
Объем раствора В, куб. мм	25,0	125,0	250,0	375	500
Массовая концентрация ацетона, мкг/куб. см	0,10	0,5	1,0	1,48	1,98

В делительную воронку помещают 2,0 куб. см градуировочного раствора, разводят дистиллированной водой до объема 40 куб. см, добавляют 2,0 куб. см 0,2%-го раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М хлористоводородной кислоте, 2 капли концентрированной хлористоводородной кислоты, 5 куб. см гексана и экстрагируют 15 мин. После расслоения жидкостей верхний слой (гексановый) переносят в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют 20 мин. со скоростью 1500 об./мин., затем 2 куб. см гексана переносят в бюксу и высушивают в потоке воздуха. Высушенный остаток растворяют в 0,4 куб. см элюента и анализируют аликвотную часть (10 куб. мм) в условиях:

элюент - (ацетонитрил:вода = 60:40) + 2,5% уксусной кислоты + 1%

диэтиламина

колонка 80 х 2 мм, заполнена Диасорбом С16;

скорость движения элюента 100 куб. мм/мин.;

длина волны УФ-детектора 358 нм;

время удерживания:

2,4-динитрофенилгидразона формальдегида 3,10 мин.;

2,4-динитрофенилгидразона ацетальдегида 3,95 мин.;

2,4-динитрофенилгидразона ацетона 4,70 мин.;

2,4-динитрофенилгидразона пропионового альдегида 5,04 мин.;

2,4-динитрофенилгидразона масляного альдегида 7,95 мин.

Градуировочный коэффициент рассчитывают по формуле:

SUM С / S

i=1 i i

К = -----------,

где:

С - концентрация вещества в градуировочной смеси, мкг/куб. см;

S - среднее значение пяти измерений площади пика i-й концентрации,

единицы оптической плотности (е.о.п.);

n - количество градуировочных смесей (n = 5).

7.6. Отбор проб

Отбор проб венозной крови в объеме не менее 4 куб. см проводят в чистую пробирку с притертой пробкой, в которую предварительно добавлено 0,1 куб. см раствора гепарина. Срок хранения пробы в холодильнике - 2 дня.

8. Выполнение измерений

Выполняют два параллельных измерения образца крови. В делительную воронку помещают 2,0 куб. см крови, разбавляют дистиллированной водой до объема 40 куб. см, добавляют по 2,0 куб. см 0,2%-го раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М хлористоводородной кислоте, 2 капли концентрированной хлористоводородной кислоты, 5 куб. см гексана и экстрагируют 15 мин. После отстаивания верхний слой (гексановый) переносят в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой и центрифугируют 20 мин. со скоростью 1500 об./мин. После расслоения жидкостей 2 куб. см гексанового экстракта переносят в бюксу и высушивают в потоке воздуха. Высушенный остаток растворяют в 0,4 куб. см элюента, вводят в хроматограф аликвотную часть (10 куб. мм) и анализируют в условиях, указанных в п. 7.5.

Идентификацию хроматографических пиков 2,4-динитрофенилгидразонов формальдегида, ацетальдегида, пропионового и масляного альдегидов и ацетона проводят путем сравнения времен удерживания хроматографических пиков в анализируемой пробе и в растворах 2,4-динитрофенилгидразонов альдегидов и ацетона, полученных согласно п. 7.3.6..

9. Вычисление результатов измерения

Концентрацию альдегидов и ацетона в крови (мкг/куб. см) вычисляют по формуле:

Х = S х К,

где:

Х - концентрация вещества в анализируемой пробе, мкг/куб. см;

S - площадь пика соответствующего 2,4-динитрофенилгидразона альдегида

(или ацетона) на хроматограмме, е.о.п.;

К - градуировочный коэффициент.

За результат измерения Х принимают среднее арифметическое значение двух

параллельных измерений Х , Х , расхождение между которыми не должно

1 2

превышать значения предела повторяемости r (табл. 3).

Результат измерения представляют в виде (Х +/- ДЕЛЬТА), мкг/куб. см,

где ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, мкг/куб. см, при Р = 0,95, равная:

дельта х Х

ДЕЛЬТА = ----------,

100

где дельта - относительное значение характеристики погрешности, %.

10. Внутренний контроль качества результатов измерений

Внутренний контроль качества (ВКК) результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость), точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве результатов измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с нормативами, не превышающими значений, приведенных в табл. 3 и 4.

Таблица 3

ЗНАЧЕНИЯ ПРЕДЕЛОВ ПОВТОРЯЕМОСТИ И ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ

ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ Р = 0,95

┌──────────────────────┬─────────────────────┬────────────────────────────┐

│ Наименование │Предел повторяемости │ Предел внутрилабораторной │

│ определяемого │ (относительное │ воспроизводимости │

│ компонента и │значение допускаемого│ (относительное значение │

│ диапазон измерений, │ расхождения между │ допускаемого расхождения │

│ мкг/куб. см │ двумя результатами │ между двумя результатами │

│ │ параллельных │ измерений, полученными в │

│ │ определений), r , % │ одной лаборатории, но в │

│ │ n │ разных условиях), R_ , % │

│ │ │ Хl │

├──────────────────────┼─────────────────────┼────────────────────────────┤

│Формальдегид, │ 26,9 │ 28,1 │

│от 0,001 до 0,100 вкл.│ │ │

│Ацетальдегид, │ 21,2 │ 24,8 │

│от 0,001 до 0,100 вкл.│ │ │

│Пропионовый альдегид, │ 25,5 │ 27,4 │

│от 0,001 до 0,100 вкл.│ │ │

│Масляный альдегид, │ 25,1 │ 26,2 │

│от 0,001 до 0,100 вкл.│ │ │

│Ацетон, │ 25,6 │ 28,3 │

│от 0,01 до 2,000 вкл. │ │ │

└──────────────────────┴─────────────────────┴────────────────────────────┘

Таблица 4

ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТОЧНОСТИ,

ПОВТОРЯЕМОСТИ, ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ

┌─────────────┬─────────────────┬──────────────────┬──────────────────────┐

│Наименование │Показатель повто-│Показатель воспро-│ Показатель точности │

│определяемого│ряемости (относи-│изводимости (отно-│(границы относительной│

│компонента и │тельное средне- │сительное средне- │ погрешности при │

│ диапазон │квадратическое │квадратическое │вероятности Р = 0,95),│

│ измерений, │отклонение │отклонение воспро-│ +/- дельта, % │

│ мг/куб. дм │повторяемости), │изводимости), │ │

│(мкг/куб. см)│сигма , % │сигма , % │ │

│ │ r │ R │ │

├─────────────┼─────────────────┼──────────────────┼──────────────────────┤

│Формальдегид,│ 11,9 │ 12,7 │ 26,5 │

│от 0,001 │ │ │ │

│до 2,000 вкл.│ │ │ │

│Ацетальдегид,│ 7,7 │ 10,2 │ 14,2 │

│от 0,001 │ │ │ │

│до 0,100 вкл.│ │ │ │

│Пропионовый │ 11,3 │ 13,5 │ 24,3 │

│альдегид, │ │ │ │

│от 0,001 │ │ │ │

│до 0,100 вкл.│ │ │ │

│Масляный │ 10,8 │ 12,7 │ 23,8 │

│альдегид, │ │ │ │

│от 0,001 │ │ │ │

│до 0,100 вкл.│ │ │ │

│Ацетон, │ 8,1 │ 10,4 │ 21,7 │

│от 0,01 │ │ │ │

│до 2,00 вкл. │ │ │ │

└─────────────┴─────────────────┴──────────────────┴──────────────────────┘

10.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Определяют содержание исследуемых соединений в градуировочных растворах, которые соответствуют началу, середине и концу диапазона измерений. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданными и измеренными значениями концентраций не превышает 5%.

10.2. Контроль повторяемости

Относительное расхождение между результатами двух измерений,

выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении

образцов одной и той же рабочей пробы с использованием одних и тех же

средств измерений и реактивов в течение возможно минимального интервала

времени, не должно превышать значения предела повторяемости r (табл. 3).

Повторяемость результатов параллельных определений признают удовлетворительной, если выполняется условие:

r Х + Х

n max min

Х - Х <= --- х -----------,

max min 100 2

где:

r - значение предела повторяемости, %;

Х , Х - максимальный и минимальный результаты двух параллельных

max min

измерений содержания i-го вещества, мкг/куб. см.

Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

10.3. Контроль воспроизводимости

Внутренний контроль качества воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и т.д.). Воспроизводимость результатов контрольных измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:

R_ Х + Х

_ _ Хl 1 2

|Х - Х | <= --- х -------,

1 2 100 2

где:

Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных

измерений, мкг/куб. см;

Х - средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных

измерений, полученный в других условиях, мкг/куб. см;

R_ - значение предела внутрилабораторной воспроизводимости, %

Хl

(табл. 3).

_ _

Расхождение между результатами измерений Х и Х , полученных в разных

1 2

условиях, не должно превышать значений показателя воспроизводимости R_ при

Хl

доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 3.

10.4. Контроль точности

Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении

результата контрольной процедуры, равного разности между результатом

контрольного измерения содержания определяемого компонента в пробе с

_ _

известной добавкой (Х'), в рабочей пробе без добавки (Х) и величиной

добавки С (добавка должна составлять не менее 40% от содержания

анализируемого компонента в рабочей пробе) с нормативом точности К.

Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется

условие:

_ _

|Х' - Х - С | = К ,

д k

где:

Х' - средний результат контрольного измерения содержания определяемого

компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных

измерений, мкг/куб. см;

Х - средний результат контрольного измерения содержания определяемого

компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, мкг/куб. см;

С - величина добавки к пробе, мкг/куб. см.

______________________________

/дельта _ 2 дельта _ 2

К = 0,84 х /(------ х Х) + (------ х Х') .

\/ 100 100

Качество контрольной процедуры признают удовлетворительным при

выполнении условия: К <= К.

При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, устраняют их.

Периодичность контроля воспроизводимости и точности регламентируется в руководстве по качеству лаборатории.

Литература

1. Химическая энциклопедия/Под. ред. И.Л.Кнунянц. М.: "Советская энциклопедия", 1988. Т. 1.

2. Химическая энциклопедия/Под. ред. И.Л.Кнунянц. М.: "Советская энциклопедия", 1990. Т. 2.

3. Филов В.А., Тиунов Л.А. Вредные химические вещества. Галоген- и кислородсодержащие органические соединения: Справочник. С.-Пб.: "Химия", 1994.

4. Химическая энциклопедия/Под. ред. Н.С.Зефирова. М.: "Большая российская энциклопедия", 1995. Т. 4.

5. Химическая энциклопедия/Под. ред. Н.С.Зефирова. М.: "Большая российская энциклопедия", 1999. Т. 5.

Методические указания разработаны Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С.Уланова, Т.Д.Карнажицкая, Г.И.Леготкина).