Утверждаю

Заместитель Министра

здравоохранения и

медицинской промышленности

Российской Федерации

Н.Н.НАГАНОВ

5 ноября 1996 г.

 

Согласовано

Начальник Управления

научных учреждений

О.Е.НИФАНТЬЕВ

4 ноября 1996 г.

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ И ПРИЕМЫ ДИАГНОСТИКИ

ЭНТЕРОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ У ДЕТЕЙ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

N 94/132

 

Составители - сотрудники НИИ детских учреждений; к.б.м. ст. науч. сотр. Мурина Е.А., д.м.м., профессор Аксенов О.А.

 

1. КРАТКАЯ АННОТАЦИЯ

 

Методические рекомендации посвящены основам и приемам диагностики энтеровирусных инфекций у детей. Обсуждаются методики ускоренной лабораторной диагностики при серозных менингитах, сообщается о новых диагностических разработках, позволявших проводить экспресс-диагностику энтеровирусных серозных менингитов.

Набор диагностических тестов основан на выявлении энтеровирусных антигенов и их типировании в новом оригинальном иммуноферментном методе, включающем в себя реакцию связывания компонента с последующим его тестированием иммунно-ферментным способом.

 

2. ВВЕДЕНИЕ

 

Значительная часть инфекционных поражений нервной системы у детей этиологически связана с энтеровирусной инфекцией. В настоящее время энтеровирусные серозные менингиты являются одной из наиболее распространенных форм этих заболеваний. Лабораторная диагностика энтеровирусов представляет значительные трудности. Они связаны с многообразием типов и подтипов возбудителей данной группы, что осложняет их обнаружение.

Выделение и типирование энтеровирусов, а, следовательно, этиологическая расшифровка энтеровирусных серозных менингитов, включает в себя большой комплекс исследований и занимает длительный период времени. Основные этапы этиологической диагностики состоят в выделении цитопатогенного агента (ЦПА) в культуре ткани или выявлении возбудителя на новорожденных мышах, накопление его и, наконец, типирование. При типировании устанавливается серотип возбудителя в реакциях нейтрализации со стандартными диагностическими сыворотками. Заключительным этапом исследования является выявление нарастания антител к выделенному аутоштамму в крови больного. Все эти процедуры в практических лабораторных условиях занимают не менее 3-4-х месяцев от появления энтеровирусных заболеваний в коллективе и начала вспышки в регионе.

На современном этапе лабораторной диагностики различных вирусных инфекций для многих из них разработаны ускоренные методы выявления антигенов или противовирусных антител к ним с использованием современных тестов на основе твердоматочных систем (РНГА с антительным и антигенным эритродитарными диагностикумами, латекс-тесты, твердофазные иммуноферментные, радиоиммунные и другие системы). Однако для диагностики энтеровирусных инфекций они практически не применимы из-за большого числа сероподтипов вирусов данной группы, и невозможности, вследствие этого, точного типирования энтеровирусного штамма. В настоящее время для этой цели используют РИГА и латексный диагностикам с целью обнаружения антигенов и антител суммарно для энтеровирусов группы Коксаки В, включающей в себя только 6 вирусов. Количество же вирусов Экхо превышает пятьдесят серотипов (и их вариантов), поэтому создание такого рода диагностикумов для этой группы практически нереально.

В то же время, в связи с появлением в лечебной практике ряда способов этиологического лечения вирусных инфекций, а также с целью дифференциальной диагностики, возникает крайняя необходимость быстрой постановки вирусологического диагноза. С другой стороны, при расшифровке вспышек энтеровирусных инфекций, хотя экспресс диагностика и не так важна, длительное вирусологическое обследование может исказить точность пейзажа вспышки из-за появления технических ошибок. В связи с этим, до настоящего времени, остается чрезвычайно актуальной проблема разработки ускоренного метода вирусологической расшифровки заболеваний энтеровирусной этиологии.

В настоящих методических рекомендациях обобщается опыт 12-летней работы лаборатории вирусологии СПб НИИ детских инфекций МЗ РФ по диагностике энтеровирусных инфекций (главным образом серозных менингитов).

 

3. ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ МЕТОДА

 

Раздел I. ОСОБЕННОСТИ КЛАССИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ

ЭНТЕРОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ

 

При классической вирусологической диагностике энтеровирусных заболеваний, и, в частности, серозных менингитов у детей, необходимо учитывать три направления этиологической расшифровки.

А. Этиологическая расшифровка эпидемических вспышек серозных менингитов в определенной географической зоне, в частности в большом городе. В данном случае в лабораторию одновременно поступает большое количество клинически однородных материалов для исследования.

Б. Этиологическая расшифровка небольших локальных вспышек инфекции в одном коллективе или семье.

В. Вирусологическое обследование материалов от больных детей, поступивших в клинику, для дифференциальной диагностики нейроинфекций различной этиологии.

В тактическом плане эти три направления имеют свои особенности при выделении и типировании энтеровирусов для постановки окончательного диагноза. В настоящих методических рекомендациях в дальнейшем не описываются основные классические принципы выделения и типирования энтеровирусов у больных, так как они достаточно полно представлены в методических рекомендациях Н.В.Галко и руководстве М.К.Ворошилова "Энтеровирусные инфекции человека" М., 1979 г.

В этом разделе мы приводим только методические особенности диагностики энтеровирусной инфекции по указанным выше трем направлениям.

 

А. Диагностика эпидемических вспышек

 

При достаточно выраженной эпидемической ситуации в городе или регионе в лабораторию одномоментно поступают материалы от значительного числа больных. В среднем (по данным НИИДИ г. СПб) в первую неделю эпидемического подъема их количество достигает 200. Из этой массы, для быстрой характеристики вспышки, достаточно взять в работу материалы от 40-60 больных. Фекальные массы больных детей, обработанные по классическим методикам с добавлением антибиотиков вносятся в тканевые культуры линий Hep-2 или Hella (для выделения вирусов группы Коксаки и полиомиелита) и диплоидную культуру фибробластов легкого эмбриона человека (для выделения вирусов группы Экхо). Выборка материалов, подвергающихся исследованию, включает в себя пациентов, поступивших в клинику главным образом на первых днях заболевания.

Выделение ЦПА проводят в течение первой недели обследования, а повторные субпассажи осуществляют только при наличии культуры ткани и свободных рабочих рук в лаборатории. Цитопатогенные агенты, выявленные в первые два дня после внесения материала в культуру ткани, могут быть дополнительно перепассированы для исключения токсического эффекта. К 4-5 дню, после начала обследования, удается обнаружить 20-25 материалов с ЦПА, которые подвергаются первичному типированию классическими методами.

Особенностью работы данного этапа являются следующие моменты:

1) не проводится накопление и титрование вируса.

Материалы с ЦПА сразу используются в опыте по типированию с поливалентными сыворотками; материал с ЦПА берется в реакцию в разведении 1:10.

2) Для проведения типирования целесообразно оставлять часть тканевой культуры, используемой при первичном заражении. Этот момент ускоряет этап первичного типирования на 5-7 дней и обеспечивает однотипность полученных результатов.

3) Окончательное типирование вирусов с моновалентными диагностическими сыворотками необходимо проводить с тем же пулом исследуемого материала, который включался в первый этап работы, для ускорения и достоверности полученных результатов.

Данный цикл исследований (при достаточном обеспечении) осуществляется за 10-12 дней. К этому сроку, а особенно если удается провести аналогичные исследования со второй группой больных, можно составить картину эпидемического подъема заболеваемости в городе. При достаточно выраженной заболеваемости такая тактика позволяет при обследовании 30-40% поступивших материалов получить достоверные результаты по этому эпидемическому подъему.

По результатам 12-летней работы НИИДИ, мы можем сделать заключение, что обследование части больных достоверно выявляет нам доминирующий тип, а также часто встречавшиеся и единичные серотипы. Для окончательного установления доминирующего типа обязательна постановка парных сывороток больных с аутоштаммом. В этом случае 4-х кратная сероконверсия или высокие титры антител проявляются практически у 80-90% больных. Оставшиеся материалы включаются в обследование по классической схеме выделения энтеровирусов, однако, после получения результатов, они практически не изменяют картину вспышки.

 

Б. Обследование локальных вспышек в коллективе или семье

 

При обследовании локальных вспышек в коллективе или семье, в отличие от первого направления, проведение пассирования исследуемого материала является неотъемлемой частью этапа работы. Делается 3-х кратное пассирование фекальных масс на двух линиях указанных выше тканевых культур с инкубированием не менее пяти суток. Связано это с тем, что обследование одиночных вспышек проводится вне эпидемического подъема заболевания и поэтому вирус оказывается менее патогенным для тканевой культуры и накапливается в первом пассаже в титрах, не дающих ЦПЭ. После обнаружения ЦПА проводится постановка классическими методиками опыта типирования, завершающего данное исследование.

Особенностью данного направления являются следующие моменты:

1) одновременно с обследованием больных проводится обследование всех лиц находившихся в контакте в данной группе или семье. Равно, как материалы от больных, так и материалы от контактных проходят 3-х кратное пассирование на двух линиях тканевых культур. При таком обследовании в 10-15% случаев у контактных лиц возможно обнаружение штаммов идентичных штаммам, выделяемым от больных. Эти лица подлежат обязательному клиническому и лабораторному наблюдению. При выделении вируса в обследуемом коллективе или в семье от больных и, особенно от контактных лиц все подвергаются повторному обследованию через 10-14 дней, где особое внимание уделяется лицам с первичным отрицательным результатом.

2) При обследовании локальных вспышек достаточно часто наблюдается положение, при котором от больных выделяются одни серотипы вирусов, а от контактных с ними лиц другие. Так по нашим данным при серозных менингитах у детей, заболевших в коллективе, более достоверно обнаружение вирусов группы Экхо (4; 6; 11; 30 серотип), а у контактных лиц группы Коксаки (4; 5; 6 серотип). В связи с этим исследование парных сывороток на наличие антител для дифференцировки вируса, вызвавшего заболевание у данной группы детей, обязательно. Проводить такую дифференцировку необходимо в одно время и в одном опыте.

 

В. Обследование детей для дифференциальной

диагностики нейроинфекций различной этиологии

 

Для обследования детей при дифференциальной диагностике нейроинфекций различной этиологии в отличие от первых двух направлений применяется следующая тактика:

1) Для обследования этих больных в лабораторию должны поступить, кроме трех проб фекаций, первая, а затем вторая сыворотка крови и обязательно ликвор, взятый в острый период заболевания (не более 0,5-0,7 мл).

2) Обследование необходимо начинать с координированного взаимоотношения между клиницистом и вирусологом, для установления возможного эпидемического диагноза на основе клинических и эпидемиологических данных. В эпидемиологическом плане особое внимание уделяется заболеваниям серозными менингитами в семье или коллективе, времени года, посещению леса, укусам клешей, а также наличию капельных инфекций и анамнестическим данным о кожных проявлениях возможно герпетической природы.

3) Диференциальный диагноз проводится между следующими клиническими формами нейроинфекции: герпетический менингоэнцефалит, менингоэнцефалиты, являющиеся осложнением коревой, краснушной и ветряночной инфекции, а также клещевой энцефалит и болезнь Лайма. Обследуемые материалы фекалий и ликвор ставятся классическими методами по определению энтеровирусов. Одномоментно, уже в первой сыворотке крови больного ребенка, определяют наличие антител к вирусу краснухи (в РТГА), кори (в РНГА), а так же клещевого энцефалита (в РСК) и болезни Лайма (в реакции непрямой иммуннофлуоресценции и РСК). При наличии антител в какой-нибудь из указанных реакций, в титре 1:20 и более, а так же отсутствий ЦПА при первичном заражении тканевых культур, дальнейшее обследование проводят только на ту инфекцию, к которой выявлены антитела. При обнаружении ЦПА в культуре ткани при первом пассаже все внимание вирусолога должно быть уделено типированию этого агента всеми классическими методами, включающими в себя не только типирование энтеровируса, но и вируса герпеса I и II серотипа в реакциях нейтрализации в культуре ткани. Если ЦПА выделен из ликвора, то по нашим данным, он скорее относится к группе герпеса или клещевого энцефалита, т.к. даже в случаях массового выделения штаммов энтеровирусов 95-97% падает на обнаружение его в фекалиях и лишь 3-5% в ликворе. При наличии ЦПА в фекалиях мы может достоверно говорить об энтеровирусной инфекции, хотя в 1-2% случаях возможно спонтанное выделение аденовирусов (перевиваемые тканевые культуры) или ротовирусов (тканевая культура первичных фибробластов человека). Их типирование проводится по специальным методикам. Типирование ЦПА, обнаруженного в фекалиях, проводят классическими тестами, но до этапа установления серогруппы. Это возможно и допустимо, т.к. окончательное установление серотипа в клиническом отношении не столь существенно, как уменьшение времени до констатации вирусологического диагноза энтеровирусной инфекции. Все методические особенности, описанные нами в первом направлении, способствующие ускорению диагностики, должны быть применены и в данном случае.

 

Раздел II. ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКА ЭНТЕРОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

 

Описанные нами в первом разделе модификации классических схем выявления энтеровирусов не только ускоряют время получения ответа, но и облегчают работу вирусолога. Однако ими невозможно проводить экспрессную диагностику с целью этиологического лечения. Основная сложность использования известных в настоящее время высокочувствительный методов для диагностики группы энтеровирусов, заключается в большом количестве серотипов и, следовательно, невозможности разработки соответствующих антительных диагностикумов. Так, например, для приготовления твердофазного иммуноферментного диагностикума, используемого для типирования энтеровируса, выделенного от одного больного, в микротесте необходима целая 96-луночная панель.

В настоящее время при любых разработанных диагностикумах и системах реакции для определения возбудителя в этой группе вирусов остается в силе основной принцип, основанный на первичном типировании вирусов с группоспецифическими диагностическими сыворотками и последующее типирование возбудителя с моносыворотками внутри обнаруженной группы.

В лаборатории вирусологии СПб НИИДИ в последние годы разработан тест экспрессного (в течение суток) выявления антигенов энтеровирусов и их типирования. Для исследования используют экстракт фекалий больного или его спинно-мозговую жидкость.

Тест базируется на оригинальной модификации жидкостного иммуноферментного анализа. Отличие данного теста от твердофазных методов заключается в том, что за основу его принята не стандартная реакция связи вируса с антителом, закрепленным на твердой матрице, а высокочувствительная разновидность реакции сорбции комплемента на иммунный комплекс, образующийся в жидкой фазе реакции между антителами диагностической сыворотки к энтеровирусу и соответствующим антигеном, присутствующим в экстракте фекалий или ликворе больного. Остаток не сорбированного на комплекс комплемента учитывается спектрофотометрически в количественном ферментном тесте.

 

МЕТОДИКА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИЙ

 

Первый этап

 

Реакция ставится в мединалово-вероналовом буфере (МВБ). Исследуемый материал (недосадочная жидкость фекалии или ликвор) в объеме 0,05 мл вносится в специальные пробирки от аппарата "Эбботт" (производство США). Количество пробирок соответствует числу группоспецифических диагностических сывороток, используемых на первом этапе исследования. Сыворотки в основном опыте добавляются к исследуемому материалу в объеме 0,05 мл. При исследовании для каждого материала дополнительно ставятся следующие контроли:

- одна пробирка с мединалово-вероналовым буфером, внесенном в объеме 0,4 мл;

- одна пробирка для контроля комплемента, куда вносится 0,1 мл МБВ и 0,1 мл комплемента;

- одна пробирка для контроля системы выявления свободного комплемента, куда вносится 0,2 мл МБВ и 0,2 м системы;

- одна пробирка для контроля исследуемого материала, куда он вносится в объеме 0,05 мл с последующим добавлением 0,05 мл МБВ;

- по одной пробирке для контроля группоспецифических диагностических сывороток, куда вносится по 0,05 мл МБВ и 0,05 мл данных сывороток.

Все пробирки при обследовании материала от одного больного помещают на "Эбботт-панель" и инкубируют в термостате при 37 град. C в течение 60 минут.

По истечении этого времени во все пробирки, исключая пробирки для контроля мединалово-вероналового буфера и контроля системы выявления свободного комплемента, добавляют четко оттитрованную одну дозу комплемента в объеме 0,1 мл. Все планшеты помещаются в термостат на 60 минут.

В это время приготавливается "ex tempore" система для выявления свободного комплемента, которая по окончании времени второго контакта, добавляется по 0,2 мл во все пробирки за исключением пробирки контроля мединалово-вероналового буфера. После проведения этого этапа работы все "Эббот-панели" с пробирками помешают в прозрачную суховоздушную баню марки УВМИ - 12-50 при t +35 град. C с остановленным шутельным механизмом. Через прозрачную крышку ведется постоянное наблюдение за кодом реакции и при появлении первых признаков гемолиза в контрольных пробирках с комплементом они извлекаются и сразу же во все пробирки добавляют смесь для выявления каталазной активности в объеме 0,5 мл. Через 5-6 минут реакция останавливается с добавлением 1,0 мл H2SO4.

Учет реакции производится сразу после добавления кислоты т.к. продолжение гемолиза в контрольных и опытных пробирках может изменить цветность реакции и, следовательно, достоверность получаемых результатов. Учитывается реакция на американском аппарате "Эбботт" при установленном фильтре 492-600 по программе "Mode-O-Ran". Измерения производятся от контроля мединалово-вероналового буфера.

Полученные результаты расшифровываются в сопоставлении всех контролей с исследуемым материалом. Наименьшее цифровое значение, выявляемое в одной из опытных пробирок смеси исследуемого материала с группоспецифической сывороткой, констатирует присутствие у больного антигена энтеровирусов соответствующей группы.

 

Второй этап

 

На втором этапе проводится внутригрупповое типирование обнаруженного антигена. Реакция проводится аналогично первому этапу, но вместо групповых диагностических сывороток используются моноспецифические. Объемы вносимых ингредиентов, проставляемые контроли и учет полученных результатов, полностью соответствуют выше описанному.

Таким образом, с помощью представленного экспресс-теста возможно в течение 4-6 часов (один рабочий день) выявить в исследуемом материале от больного антигены энтеровирусов, оттипировать соответствующий вирус, принципиально оценить его количество и дать заключение о наличии энтеровирусной инфекции.

Проведенные в вирусологической лаборатории НИИДИ г. СПб исследования подтверждают эффективность данного метода, особенно при определении пейзажа эпидемии и обследовании отдельных вспышек. При дифференциальной диагностике энтеровирусной инфекции у отдельных больных, экспресс-метод должен быть дополнен этапом выявления сероконверсий в парных сыворотках. При выявлении вирусного антигена у больного и необходимости срочного определения антител к нему, мы предлагаем вариант экспрессного определения антител с использованием антигена, обнаруженного у больного. Обследование проводится по описанной выше схеме, где в основной опыт вносится прогретая сыворотка больного в разведении 1:10 и указанный антиген.

Снижение показателей экстинкции на 25% от уровня контроля исследуемой сыворотки соответствует титру антител 1:10 - 1:20, на 40% - 50% - 1:40 - 1:80, а выше 50%, титру 1:160.

Этим же методом можно проставлять и парные сыворотки, рассчитывая сероконверсию, как по указанным титрам, так и непосредственно по уменьшению спектрофотометрических показателей.

Достоверность представленного зкспресс-теста обоснована в вирусологической лаборатории НИИДИ г. СПб двухгодичным параллельным изучением этиологии серозных менингитов у детей с помощью данного экспрессного и классического методов определения энтеровирусов. На описанный выше способ получено авторское свидетельство N от и, в настоящее время, оформляется патент.

 

4. КРИТЕРИИ НОВИЗНЫ

 

Основной новизной предлагаемого комплекса методов является использование ускоренного иммуноферментного теста жидкостного типа для обнаружения и типирования энтеровирусных антигенов в фекалиях и ликворе больных. Предлагаемые методы, в отличие от ранее используемых, позволяют:

- значительно ускорить диагностику энтеровирусных инфекций, особенно с применением иммуноферментного теста, где обнаружение и типирование возможно в течений 24 часов от получения материала;

- для иммуноферментного теста применен оригинальный, патентуемый в настоящее время, способ, где впервые использовано сочетание стандартной реакций связывания комплемента в антигентестируемом варианте с иммуноферментным способом обнаружения остаточного комплемента;

- в предложенном способе в течении одних суток не только устанавливается присутствие в обследуемом материале энтеровирусов, но и дается их количественная характеристика и подтверждается тип обнаруженного энтеровируса;

- предлагаемый способ не требует специального диагностикума, исследования проводятся со стандартными наборами диагностических энтеровирусных сывороток.

 

5. НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАКТИВЫ

 

Ингредиенты реакции для осуществления иммуноферментного тестирования. В данном экспрессном тесте используют следующие составляющие:

    1) Материалы   от   больных  в  исследованиях   используются   фекалии,

полученные  от больного в течение трех дней, которые обрабатываются в среде

199  с  добавлением  антибиотиков  из  расчета 10000 ед. на 1 мл полученной

                                                           /\

суспензии.   После   24   часовой  экспозиции  при   t  +4 │  град. C   они

центрифугируются  при  1500  оборотов  в минуту в течение 15 минут. В опыте

используется  надосадочная  жидкость  с pH равной 7,2-7,5. Ликвор больного,

используемого  для  исследования, так же подвергается центрифугированию при

1500  оборотов  в  течение 15 минут. Приготовленные таким способом ликвор и

экстракт фекалий используется в опыте в нативном неразведенном виде.

2) Типоспецифические диагностические сыворотки к энтеровирусам групп Коксаки A, B, Экхо, а так же Энтеро 68, 69, 70, 71 и полиомиелита I, II, III типа производства Московского института полиомиелита и вирусных энцефалитов. Сыворотки используют в двухкратном разведении по отношению к титру, указанному в инструкции.

    3) Комплемент. В реакции используется стандартный высушенный комплемент

Уфимского  НИИ  вакцин  и сывороток или другого аналитического производства

для  реакции  связывания комплемента. Содержимое ампулы разводится согласно

инструкции  и  титруется  в  стандартной реакции определения комплемента. В

исследованиях  используется  точно  одна  гемолитическая  доза комплемента.

                                       /\

Рабочий раствор может храниться при +4 │  град. C не более 18 часов.

4) Система выявления свободного комплемента на конечном этапе реакции. Теоретической основой выявления свободного комплемента в описываемой модификации экспрессного выявления энтеровирусов, является полученный нами факт усиления каталазной активности эритроцитов при одновременном контакте их с комплементом и гемолитической сывороткой. Поэтому система выявления свободного комплемента слагается из следующих ингредиентов:

- бараньи эритроциты. Суспензия бараньих эритроцитов готовится на мединалово-вероналовом буфере. Концентрация ее рассчитывается в специально проведенном опыте, где 0,1 мл осадка, свежеприготовленных бараньих эритроцитов, добавляют в 10 мл дистиллированной воды с последующим титрованием в 6-7 пробирках с коэффициентом 2. Степень гемолиза учитывается спектрофотометрически при длине волны 410 нМ. Разведение в пробирке, давшей показатель экстинкции в пределах 0,400-0,500 ОЕ, пересчитывается на исходную концентрацию эритроцитов и таким образом приготавливается соответствующее рабочее разведение эритроцитарной суспензии;

- гемолитическая сыворотка. В опыте используется стандартная диагностическая гемолитическая сыворотка для реакции связывания комплемента, производства НПО "Биомед" г. Пермь - 89. Сыворотка перед опытом титруется в стандартной реакции связывания комплемента и используется для составления системы в концентрации соответствующей 1,5-2,0 гемолитическим единицам. Система для учета свободного комплемента приготавливается "ex tempore" непосредственно перед внесением. Для приготовления рабочего раствора соединяют равные объемы приготовленной дозы эритроцитов и гемолитической сыворотки.

Достоверные результаты экспресс-диагностики получают только при четком приготовлении (согласно описанному выше) всех ингредиентов системы выявления свободного комплемента. Даже при незначительном изменении указанного соотношения эритроцитов и гемолитической сыворотки меняются отношения между эндогенной каталазой эритроцитов, каталазной активностью гемоглобина и пероксидазой мембраны эритроцита (каталазный комплекс), что существенно искажает результаты реакции.

5) Смесь для выявления каталазной активности. На последнем этапе реакции выявление каталазного комплекса осуществляется с помощью смеси 0,1% ортофенилендиалина (ОФД) производства фирмы "Сигма" и 3% раствора перекиси водорода в равных количествах.

6) Реактив для остановки реакции. С этой целью в реакцию вводится однонормальная стандартная серная кислота.

 

6. ОЖИДАЕМЫЙ ЭФФЕКТ ОТ ВНЕДРЕНИЯ

 

Использование набора предлагаемых тестов дает возможность:

- ускорение расшифровки этиологии энтеровирусных вспышек (в частности серозных менингитов у детей);

- быстрая диагностика энтеровирусных серозных менингитов, дающая возможность дифференцировки диагноза с дальнейшем целенаправленным лечением;

- экономии материалов для исследования в связи с исключением из работы этапа тканевых культур (культура ткани, среды, растворы);

- экономия рабочего времени врача и лаборанта, дающее возможность увеличения количества проводимых исследований.

 

7. ПОКАЗАНИЯ И ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ

РЕКОМЕНДУЕМОГО МЕТОДА

 

Показаниями к применению предложенных способов является:

- расшифровка вспышек серозных менингитов и других энтеровирусных заболеваний;

- обследование отдельных больных для дифференцировки диагноза.

Противопоказания к использованию рекомендуемого метода практически отсутствуют.