Утверждаю
Главный врач ФГУЗ "Федеральный
центр гигиены и эпидемиологии",
Председатель Лабораторного совета
Федеральной службы по надзору
в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека
А.И.ВЕРЕЩАГИН
30 июня 2008 года
ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ИХ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИБИОТИКАМ С ПРИМЕНЕНИЕМ
АВТОМАТИЧЕСКОГО МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗАТОРА
VITEK 2 COMPACT
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
МР 02.032-08
1. Разработаны:
ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора;
НИИ Антимикробной химиотерапии ГОУ ВПО
"Смоленская государственная медицинская академия Федерального агентства по
здравоохранению и социальному развитию";
ФГУЗ ФЦГиЭ Московской области;
ФГУЗ ГЦГСЭН Министерства обороны РФ
при участии ООО "Биомерье", г.
Москва.
2. Рекомендованы к утверждению
Лабораторным советом Роспотребнадзора (протокол N 4 от 30.06.2008).
3. Утверждены и введены в действие
Председателем Лабораторного совета, Главным врачом ФГУЗ ФЦГиЭ Роспотребнадзора
А.И. Верещагиным 30 июня 2008 г.
4. Введены впервые.
1. Область
применения
Настоящие Методические рекомендации
предназначены для применения в лабораториях организаций, независимо от форм
собственности, осуществляющих бактериологические исследования с целью выделения
и идентификации патогенных биологических агентов (ПБА) бактериальной этиологии
(бактерий, грибов) из клинического материала, объектов окружающей среды, а
также определения их чувствительности к антимикробным препаратам.
2. Нормативные
ссылки
2.1. СП 1.3.1285-03 "Безопасность
работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)".
2.2. СП 1.3.2322-08 "Безопасность
работы с микроорганизмами III - IV группы патогенности (опасности) и
возбудителями паразитарных болезней".
2.3. СанПиН 2.1.7.728-99 "Правила
сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений".
2.4. "Временные рекомендации
(правила) по охране труда при работе в лабораториях (отделениях, отделах)
санитарно-эпидемиологических учреждений системы Минздрава России". М.,
2002.
2.5. "Инструкция по мерам профилактики
распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических
лабораториях лечебных и профилактических учреждений". М., 1991.
3. Общие положения
Идентификация основана на анализе
изменения биохимических субстратов под действием микроорганизмов. Определение
чувствительности производится на основании подавления роста микроорганизмов под
действием различных концентраций антибиотиков. При этом определяются
минимальные ингибирующие концентрации (МИК) антибиотиков, которые выражаются в
мг/л и интерпретируются в виде категорий "устойчив",
"чувствителен", "умеренно устойчив".
4. Сущность метода
Работа в анализаторе VITEK 2 Compact
проводится с чистой культурой микроорганизма. В качестве расходных материалов
используются пластиковые карты, содержащие биохимические субстраты (ID-карты,
карты для идентификации) или антибиотики в различных концентрациях (AST-карты,
карты для определения чувствительности). Карты под вакуумом, создаваемым
анализатором, в автоматическом режиме заполняются суспензией чистой культуры
микроорганизмов, запаиваются и помещаются в карусель, где они инкубируются и
регулярно (каждые 15 минут) сканируются оптической системой анализатора. При этом
для считывания ID-карт используется колориметрия (анализатор содержит 2
оптических модуля и использует волны 660, 428 и 568 нанометров), для считывания
AST-карт - турбидиметрия (фиксируется изменение плотности микробной суспензии
под влиянием антибиотика). Результаты сканирования подвергаются компьютерной
обработке. По завершении идентификации анализатор найдет в базе данных
соответствие тестируемому микроорганизму или проведет определение
чувствительности к антибиотикам, после чего карта сбрасывается в специальный
приемник.
5. Методы отбора и
подготовки проб
Исследуемый материал инокулируется на
питательные среды согласно методам микробиологических исследований,
утвержденных в установленном порядке. Чашки инкубируются 18 - 24 (48) ч до
получения изолированных колоний. Колонии микроорганизмов для исследования на
VITEK 2 Compact рекомендуется брать с неселективных питательных сред.
Используется только чистая культура микроорганизмов.
6. Аппаратура,
материалы, реактивы и питательные среды
Анализатор Vitek 2 Compact
Суспензиальный раствор (0,45% раствор
хлорида натрия)
Диспенсер суспензиального раствора
Пластиковые пробирки для анализатора
Vitek 2 Compact
Карты для идентификации
Карты для определения чувствительности
Петли бактериологические
Тампоны стерильные
Денситометр
7. Подготовка к
испытанию
Перед началом работы необходимо, следуя
инструкциям программного обеспечения, ввести информацию об используемых
AST-картах, а также произвести ряд общих настроек: настроить печать
(автоматическая или по требованию) и прочие параметры, следуя инструкции
пользователя по программному обеспечению.
Чистая культура (материал одной или
нескольких изолированных колоний) с помощью бактериологической петли или
тампона вносится в пластиковую пробирку с суспензиальным раствором и
гомогенизируется там до достижения требуемой плотности бактериальной суспензии
<1>:
для грамположительных и грамотрицательных
бактерий: 0,5 - 0,63 McF <2>;
для прихотливых бактерий: 2,7 - 3,3 McF;
для бацилл: 1,8 - 2,2 McF;
для грибов: 1,8 - 2,2 McF.
--------------------------------
<1> Работа с ПБА I - II должна
проводиться в соответствии с СП 1.3.1285-03.
<2> Стандарт 1 McF (мутности по
МакФарланду) соответствует 300 миллионам бактериальных клеток в мл.
Выбор карты для исследования производится
на основании окраски по Граму или пробы с КОН, позволяющей разделить бактерии
на грамположительные и грамотрицательные. При этом следует использовать карты
VITEK 2 GP (грамположительные) или VITEK 2 GN (грамотрицательные) соответственно.
Микроорганизмы, прихотливые к условиям культивирования (нейссерии, гемофилы и
прочие <3>), идентифицируются при помощи карт VITEK 2 NH, грибы - карт
VITEK 2 YST. Карты VITEK 2 BCL предназначены для идентификации микроорганизмов
рода Bacillus.
--------------------------------
<3> Перечень микроорганизмов,
идентифицируемых на различных картах, см. в Приложении.
Пробирки с суспензиями устанавливаются в
кассету, напротив них в специальные прорези (слоты) устанавливаются
соответствующие карты, так, чтобы относящаяся к карте пластиковая трубочка была
погружена в пробирку.
8. Проведение
испытания
8.1. Работа в режиме виртуальной кассеты
Виртуальная кассета создается согласно
инструкции по программному обеспечению. В соответствующие ячейки образовавшейся
таблицы вводится номер штрих-кода (путем считывания штрих-кода ридером), рядом
с которым проставляются лабораторные номера. Затем созданную "виртуальную
кассету" необходимо сохранить в памяти компьютера. (Время от момента
сохранения "виртуальной кассеты" до момента загрузки собственно
кассеты с картами в прибор не должно превышать 30 минут.)
Далее следует приступить к загрузке
кассеты с картами в вакуумную камеру анализатора. Перед тем как загружать
кассету в камеру, следует убедиться (это отображено на маленьком собственном
мониторе анализатора), что статус прибора "ok", вакуумная камера
готова к работе и в карусели имеется достаточное количество свободных мест. В
том случае, если все эти условия соблюдены, можно открыть дверцу вакуумной
камеры, поместить туда кассету с картами, плотно закрыть дверцу и нажать на
клавишу "Начать заполнение".
В процессе заполнения карт суспензией в
вакуумной камере рекомендуется не отходить от анализатора и, дождавшись
(ожидание занимает 70 секунд), когда раздастся сигнал и замигает стрелка
индикатора, открыть камеру. При этом разблокируется дверца загрузочного модуля,
которую следует открыть и переставить кассету с заполненными картами из одной
камеры в другую. Затем дверцы анализатора следует закрыть в произвольной
последовательности. Если кассета не будет перенесена из вакуумной камеры в
загрузочный модуль в течение 10 минут, прибор не примет ее для дальнейшего
исследования.
После помещения кассеты в загрузочный
модуль рекомендуется дождаться окончания процесса считывания штрих-кодов
(занимает примерно 1 минуту), не отходя от анализатора. Мелодичный сигнал
говорит о нормально прошедшем процессе считывания. Грубый звук сигнализирует об
имеющихся ошибках. В последнем случае следует установить причину ошибок, вызвав
их описание на дисплее анализатора. После нормально прошедшей загрузки
индикатор загрузочного модуля будет показывать мигающую синюю стрелку. Кассету
с оставшимися пробирками из этой камеры прибора можно извлечь сразу или в
другое время (например, при загрузке следующей кассеты).
8.2. Работа в режиме постановки тестов с
последующим описанием
При данном режиме работы кассета с
картами помещается в вакуумную камеру и дальше - в загрузочный модуль без
предварительного этапа внесения данных в компьютер. В этом случае результаты
обработки карт в окне результатов изолята появятся только после внесения
необходимой информации (лабораторного номера) в таблицу окна постановки тестов
с последующим описанием.
8.3. Внесение данных об образце
Внести данные об образце (если эта
функция активирована) можно как до момента загрузки карт в анализатор, так и
после завершения обработки карт. При этом нужно иметь в виду, что результаты
анализов с отсутствующей информацией об образце не будут переноситься в архив.
9. Обработка
результатов
После считывания карт полученные
результаты анализируются программным обеспечением.
Результаты исследования карт можно
просмотреть (распечатать) в соответствующем окне интерфейса.
10. Ограничение
метода
Корректная идентификация и определение
чувствительности с использованием анализатора VITEK 2 Compact возможны только
для микроорганизмов, имеющих клиническое значение.
Приложение
МИКРООРГАНИЗМЫ, ИДЕНТИФИЦИРУЕМЫЕ НА КАРТАХ VITEK
2
(Наименования идентифицируемых
анализатором Vitek 2 Compact микроорганизмов приводятся в соответствии с 9-м
изданием Определителя бактерий Берджи с учетом последних изменений,
опубликованных в International Journal of Systematic and Evolutionary
Microbiology (www.bacterio.net).)
┌─────────────────────────────────────────────────────────────────────────┐
│ Бактерии, идентифицируемые на
карте VITEK 2 GN │
├─────────────────────────────────────┬───────────────────────────────────┤
│ Enterobacteriaceae │ Не Enterobacteriaceae │
├─────────────────────────────────────┼───────────────────────────────────┤
│Buttiauxella
agrestis │Achromobacter
denitrificans │
│Cedecea davisae │(ранее Achromobacter │
│Cedecea lapagei │xylosoxidans ssp.
denitrificans) │
│Citrobacter amalonaticus │Achromobacter
xylosoxidans │
│Citrobacter braakii │(ранее Achromobacter │
│Citrobacter farmeri │xylosoxidans ssp.
xylosoxidans) │
│Citrobacter freundii │Acinetobacter
baumannii │
│Citrobacter koseri │Acinetobacter
haemolyticus │
│Citrobacter sedlakii │Acinetobacter
junii │
│Citrobacter youngae │Acinetobacter
lwoffii │
│Edwardsiella hoshinae │Actinobacillus
ureae │
│Edwardsiella tarda │Aeromonas
hydrophila/Aeromonas │
│Enterobacter aerogenes │cavlae │
│Enterobacter amnigenus 1 │Aeromonas salmonicida │
│Enterobacter amnigenus 2 │Aeromonas sobria │
│Enterobacter asburiae │Aeromonas veronii │
│Enterobacter
cancerogenus │Alcaligenes
faecalis ssp. faecalis │
│Enterobacter cloacae │Bordetella
bronchiseptica │
│Enterobacter gergoviae │Bordetella trematum │
│Enterobacter intermedius │Brevundimonas
diminuta/vesicularis │
│Enterobacter sakazakii │Brucella melitensis │
│Escherichia coli │Budvicia
aquatica │
│Escherichia coli 0157 │Burkholderia cepacia группа │
│Escherichia fergusonii │Burkbolderia
gladioli │
│Escherichia hermannii │Burkholderia mallei │
│Escherichia vulneris │Burkholderia pseudomallei │
│Ewingella americana │CDC группа EF-4 (Pasteurella) │
│Hafhia alvei │Chromobacterium
violaceum │
│Klebsiella oxytoca │Chryseobacterium
gleum │
│Klebsiella pneumoniae ssp.
ozaenae │Chryseobacterium
indologenes │
│Klebsiella pneumoniae ssp.
pneumoniae│Chryseobacterium meningosepticum │
│Klebsiella pneumoniae
ssp. │Comamonas
testosteroni │
│rhinoscleromatis │Delftia
acidovorans │
│Kluyvera ascorbata │Francisella
tularensis │
│Kluyvera cryocrescens │Grimontia hollisae │
│Leclercia adecarboxylata │(ранее Vibrio hollisae) │
│Moellerella wisconsensis │Mannheimia haemolytica │
│Morganella morganii ssp.
morganii │Methylobacterium
spp. │
│Morganella morganii ssp.
sibonii │Moraxella группа │
│Pantoea agglomerans │Myroides spp. │
│Pantoea spp. │Ochrobactrum
anthropi │
│Proteus mirabilis │Oligella
ureolytica │
│Proteus vulgaris группа/Proteus │Paracoccus yeeii (ранее CDC группа │
│penneri │EO-2) │
│Providencia
alcalifaciens │Pasteurella
aerogenes │
│Providencia rettgeri │Pasteurella multocida │
│Providencia rustigianii │Rasteurella
pneumotropica │
│Providencia stuartii │Photobacterium
damselae │
│Rahnella aquatilis │Piesiomonas shigelloides │
│Raoultella
ornithinolytica │Pseudomonas
aeruginosa │
│Salmonella enterica ssp.
anzonae │Pseudomonas
alcaligenes │
│(ранее Salmonella choleraesuis ssp. │Pseudomonas fluorescens │
│arizonae) │Pseudomonas
luteola │
│Salmonella группа │Pseudomonas
mendocina │
│Salmonella ser.
Gallinarum │Pseudomonas
oryzihabitans │
│Salmonella ser. Paratyphi
A │Pseudomonas pseudoailcaligenes │
│Salmonella ser. Typhi │Pseudomonas putida │
│Serratia ficaria │Pseudomonas
stutzeri │
│Serratia fonticola │Ralstonia
mannitolilytica │
│Serratia liquefaclens группа │Ralstonia pickettii │
│Serratia marcescens │Rhizobium
radiobacter │
│Serratia odorifera │Shewaneiia
putrefaciens │
│Serratia plymuthica │Sphingobacterium
multivorum │
│Serratia rubidaea │Sphingobacterium
spiritivorum │
│Shigella группа │Sphingobacterium
thalpophiium │
│Shigella sonnei │Sphingomonas
paucimobilis │
│Yersinia enterocolitica группа │Stenotrophomonas maltophilia │
│Yersinia pestis │Vibrio
alginolyticus │
│Yersinia
pseudotuberculosis │Vibrio
cholerae │
│Yersinia ruckeri │Vibrio
fluvialis │
│Yokenella regensburgei │Vibrio metschnikovii │
│ │Vibrio
mimicus │
│ │Vibrio
parahaemolyticus │
│ │Vibrio
vulnificus │
│ │Wautersia
paucula (ранее
Ralstonia │
│ │paucula) │
│Высоко вирулентные виды │ │
│Brucella melitensis │ │
│Burlkholderia mallei │ │
│Burlkholderia
pseudomallei │ │
│Escherichia coli 0157 │ │
│Francisella tularensis │ │
│Vibrio cholerae │ │
│Yersinia pestis │ │
└─────────────────────────────────────┴───────────────────────────────────┘
┌─────────────────────────────────────────────────────────────────────────┐
│ Бактерии, идентифицируемые на
карте GP │
├─────────────────────────────────────┬───────────────────────────────────┤
│Abiotrophia defectiva │Streptococcus constellatus │
│Aerococcus urinae │ssp.
constellatus │
│Aerococcus viridans │Streptococcus
constellatus │
│Alloiococcus otitis │ssp. pharyngis │
│Dermacoccus nishinomiyaensis/ │Streptococcus cristatus │
│Kytococcus sedentarius │Streptococcus downel │
│Enterococcus avium │Streptococcus
dysgalactiae ssp. │
│Enterococcus
casseliflavus │dysgalactiae │
│Enterococcus cecorum │Streptococcus
dysgalactiae ssp. │
│Enterococcus columbae │equisimilis │
│Enterococcus durans │Streptococcus equi
ssp. equi │
│Enterococcus faecalis │Streptococcus equi
ssp. │
│Enterococcus faecium │zooepidemicus │
│Enterococcus gallinarum │Streptococcus equlnus │
│Enterococcus hirae │Streptococcus
gallolyticus ssp. │
│Enterococcus raffinosus │gallolyticus │
│Enterococcus
saccharolyticus │Streptococcus
gallolyticus ssp. │
│Erysipelothrix
rhusiopahiae │pasteurlanus │
│Facklamia hominis │Streptococcus
gordonii │
│Gardnerella vaginalis │Streptococcus
hyointestinalis │
│Gemella bergeri │Streptococcus
infantarius ssp. │
│Gemella haemolysans │infantarius │
│Gemella morbillorum │Streptococcus
infantarius │
│Gemella sanguinis │ssp.
coli/Streptococcus bovis │
│Giobicatella sanguinis │Staphylococcus
epidermidis │
│Giobicatella
suifidifaciens │Staphylococcus
equorum │
│Granuiicatella adiacens │Staphylococcus
gallinarum │
│Granuiicatella eiegans │Staphylococcus
haemolyticus │
│Helcococcus kunziii │Staphylococcus
hominis │
│Kocuria kristinae │Staphylococcus
hyicus │
│Kocuria rosea │Staphylococcus
intermedius │
│Kocuria varians │Staphylococcus
kloosii │
│Lactococcus garvieae │Staphylococcus
lentus │
│Lactococcus lactis ssp.
cremoris │Staphylococcus
lugdunensis │
│Lactococcus lactis ssp.
lactis │Staphylococcus
saprophyticus │
│Lactococcus
raffinolactis │Staphylococcus
schleiferi │
│Leuconostoc citreum │Staphylococcus
sciuri │
│Leuconostoc lactis │Staphylococcus simulans │
│Leuconostoc mesenteroides
ssp. │Staphylococcus
vitulinus │
│cremoris │Staphylococcus
warneri │
│Leuconostoc mesenteroides
ssp. │Staphylococcus
xylosus │
│dextranicum │Streptococcus
agalactiae │
│Leuconostoc mesenteroides
ssp. │Streptococcus
alactolyticus │
│mesenteroides │Streptococcus
anginosus │
│Leuconostoc pseudomesenteroides │Streptococcus canis │
│Listeria grayi │Streptococcus
intermedius │
│Listeria innocua │Streptococcus
mitis/Streptococcus │
│Listeria ivanovii │oralis │
│Listeria monocytogenes │Streptococcus mutans │
│Listeria seeligeri │Streptococcus
ovis │
│Listeria welshimeri │Streptococcus
parasanguinis │
│Micrococcus luteus/lylae │Streptococcus
pluranimalium │
│Pediococcus acidilactici │Streptococcus
pneumoniae │
│Pediococcus pentosaceus │Streptococcus
porcinus │
│Rothia mucilaginosa │Streptococcus
pyogenes │
│Staphylococcus arlettae │Streptococcus
salivarius │
│Staphylococcus aureus
<*> │Streptococcus
sanguinis │
│Staphylococcus
auricuiaris │Streptococcus sobrinus │
│Staphylococcus capitis │Streptococcus suis I │
│Staphylococcus caprae │Streptococcus suis
II │
│Staphylococcus carnosus ssp.
carnosus│Streptococcus thermophilus │
│Staphylococcus
chromogenes │Streptococcus
thoraltensis │
│Staphylococcus cohnii ssp.
cohnii │Streptococcus
uteris │
│Staphylococcus cohnii
ssp. │Streptococcus
vestibularis │
│urealyticus С (ранее Staphylococcus
│Vagococcus fluvialis
│
│cohnii ssp. urealyticum) │ │
└─────────────────────────────────────┴───────────────────────────────────┘
--------------------------------
<*> Staphylococcus aureus включает только подвид aureus.
┌─────────────────────────────────────────────────────────────────────────┐
│ Бактерии, идентифицируемые на
карте NH │
├─────────────────────────────────────┬───────────────────────────────────┤
│Actinobacillus ureae │Haemophilus segnis │
│Campylobacter coli │Haemophilus
parainfluenzae │
│Campylobacter fetus ssp.
fetus │Kingella
denitrificans │
│Campylobacter jejuni ssp.
jejuni │Kingella kingae │
│Capnocytophaga spp. │Moraxella
(Branhamella) catarrhalis│
│Cardiobacterium hominis │Neisseria cinerea │
│Eikenella corrodens │Neisseria elongata │
│Gardnerella vaginalis │Neisseria
gonorrhoeae │
│Haemophilus
actinomycetemcomitans │Neisseria
lactamica │
│Haemophilus aphrophilus/ │Neisseria meningitidis │
│paraphrophilus │Neisseria
sicca │
│Haemophilus haemolyticus │Oligella urethralis │
│Haemophilus influenzae │Suttonella
indologenes │
│Haemophilus
parahaemolyticus │ │
└─────────────────────────────────────┴───────────────────────────────────┘
┌─────────────────────────────────────────────────────────────────────────┐
│ Грибы, идентифицируемые на
карте YST │
├─────────────────────────────────────┬───────────────────────────────────┤
│Candida albicans │Candida utilis │
│Candida boidinii │Candida
zeylanoides │
│Candida catenulata │Cryptococcus
albidus │
│Candida colliculosa │Cryptococcus
laurentii │
│Candida dubliniensis │Cryptococcus
neoformans │
│Candida famata │Cryptococcus
terreus │
│Candida freyschussii │Cryptococcus
uniguttulatus │
│Candida glabrata │Geotrichum
capitatum │
│Candida guilliermondii │Geotrichum kiebahnii │
│Candida haemulonii │Kioeckera spp. │
│Candida intermedia │Kodamaea ohmeri │
│Candida kefyr │Malassezia
furfur │
│Candida krusei/Candida
inconspicua/ │Malaiassezia
pachydermatis │
│Candida lambica │Pichia
farinosa │
│Candida lipolytica │Prototheca
wickerhamii │
│Candida lusitaniae │Prototheca
zopfii │
│Candida magnoliae │Rhodotorula
glutinis/Rhodotorula │
│Candida norvegensis │mucilaginosa │
│Candida parapsilosis │Rhodotorula minuta │
│Candida peliculosa │Saccharomyces
cerevisiae │
│Candida pulchemma │Sporoboiomyces
salmonicolor │
│Candida rugosa │Steplianoascus
ciferrii │
│Candida sake │Trichosporon
asahii │
│Candida sphaerica │Trichosporon
inkin │
│Candida tropicalis │Trichosporon
mucoides │
│ │Zygosaccharomyces
bailii │
└─────────────────────────────────────┴───────────────────────────────────┘
┌─────────────────────────────────────────────────────────────────────────┐
│ Бактерии, идентифицируемые на
карте BCL │
├─────────────────────────────────────┬───────────────────────────────────┤
│Aneurinibacillus
aneurinilyticus │Brevibacillus
centrosporus │
│Bacillus
amyloliquefaciens │Brevibacillus
choshinensis │
│Bacillus anthracis │Brevibacillus
invocatus │
│Bacillus badius │Brevibacillus
laterosporus │
│Bacillus cereus │Brevibacillus
parabrevis │
│Bacillus circulans │Geobacillus
stearothermophilus │
│Bacillus coagulans │Geobacillus
thermodenitrificans │
│Bacillus firmus │Geobacillus
thermoglucosidasius │
│Bacillus fusiformis │Paenibacillus alvei │
│Bacillus lentus │Paenibacillus
amylolyticus │
│Bacillus licheniformis │Paenibacillus durus (ранее │
│Bacillus megaterium │Paenibacillus azotofixans) │
│Bacillus mycoides │Paenibacillus
glucanolyticus │
│Bacillus pumilus │Paenibacillus
macerans │
│Bacillus smithii │Paenibacillus
pabuli │
│Bacillus sphaericus │Paenibacillus
peoriae │
│Bacillus
sporothermodurans │Paenibacillus
polymyxa │
│Bacillus subtilis │Paenibacillus
thiaminolyticus │
│Bacillus thuringiensis │Paenibacillus validus │
│Brevibacillus agri │Virgibacillus
pantothenticus │
│Brevibacillus
borstelensis │Virgibacillus
proomii │
│Brevibacillus
brevis │ │
└─────────────────────────────────────┴───────────────────────────────────┘