"МУК 4.2.2886-11. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Идентификация микроорганизмов и определение чувствительности их к антибиотикам с применением автоматизированной системы для биохимического анализа. Методические указания" // Портал о здоровье, заболеваниях и лечении, о лекарствах, о докторах и больницах.

Утверждаю

Руководитель Федеральной

службы по надзору в сфере

защиты прав потребителей

и благополучия человека,

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

30 июня 2011 года

Дата введения:

с момента утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ

ИХ К АНТИБИОТИКАМ С ПРИМЕНЕНИЕМ АВТОМАТИЗИРОВАННОЙ СИСТЕМЫ

ДЛЯ БИОХИМИЧЕСКОГО АНАЛИЗА

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.2.2886-11

1. Разработаны ФГУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора; ФГУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора; ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в г. Москве" при участии ООО "СИ-ЛАБ", Москва.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г. Онищенко 30.06.2011.

4. Введены впервые.

1. Область применения

1.1. Настоящие Методические указания устанавливают методы идентификации патогенных биологических агентов, обнаруженных в продовольственном сырье и пищевых продуктах, парфюмерно-косметической и другой продукции, объектах окружающей среды, клиническом (биологическом) материале, и устанавливают методы определения чувствительности выделенных микроорганизмов к антимикробным препаратам.

1.2. Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, парфюмерно-косметической и другой продукции, объектов окружающей среды, а также могут быть использованы для проведения производственного контроля другими испытательными лабораториями, аккредитованными в установленном порядке.

2. Нормативные ссылки

1. Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ.

2. Федеральный закон "О качестве и безопасности пищевых продуктов" от 2 января 2000 г. N 29-ФЗ.

3. Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к товарам, подлежащим санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю), утверждены решением Комиссии таможенного союза от 28 мая 2010 г. N 299.

4. СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)".

5. СП 1.3.2322-08 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней".

6. СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов" (с изменениями и дополнениями).

7. СанПиН 1.2.681-97 "Производство и контроль парфюмерно-косметической продукции для обеспечения ее безопасности и качества".

8. СанПиН 2.1.3.2630-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность".

9. МУК 4.2.1890-04 "Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам".

10. ГОСТ Р ИСО 7218-2008 "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям".

11. Инструкция по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебных и профилактических учреждений. М., 1991.

3. Общие положения

3.1. Автоматизированная система для биохимического анализа (далее - система) может быть использована при биохимической идентификации видовой принадлежности штаммов микроорганизмов, выделенных из различного материала, в соответствии с действующими методическими документами и определении чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам. Биохимическая идентификация микроорганизмов с применением системы может осуществляться альтернативно биохимической идентификации, проводимой общепринятыми методами in vitro.

3.2. Работы по идентификации микроорганизмов и определению чувствительности их к противомикробным препаратам с применением системы следует осуществлять в соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов, регламентирующих безопасность работы с патогенными биологическими агентами.

4. Сущность метода

4.1. Идентификация микроорганизмов с применением системы основана на регистрации и анализе результатов изменения биохимических субстратов под действием микроорганизмов (биохимическая идентификация) в сопоставлении с базой данных, включающей информацию о биохимических профилях микроорганизмов.

4.2. Принцип определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам с применением системы основан на определении ингибиции роста микроорганизмов антимикробными препаратами различных концентраций с установлением их минимальных ингибирующих концентраций (МИК) либо на выявлении множественной лекарственной устойчивости микроорганизмов.

4.3. Система позволяет осуществлять идентификацию аэробных и факультативно-анаэробных бактерий различных групп и семейств, дрожжевых, дрожжеподобных и других микроскопических грибов (Прилож. 1).

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и антимикотическим препаратам осуществляется с применением системы и различных типов планшет (Прилож. 2).

4.4. Система включает фотометр, который позволяет считывать результаты, полученные при проведении идентификации микроорганизмов и определении их чувствительности к антибиотикам на адаптированных к ней тест-планшетах. Результаты обрабатываются и интерпретируются автоматически. Информация о результатах идентификации микроорганизмов (с указанием рода, вида, биотипа, альтернативного близкородственного вида, статистических данных) отражается на экране компьютера в течение нескольких секунд. Возможно сохранение данных на диске и вывод их на печать.

4.5. Наименования микроорганизмов, идентифицируемых системой, приводятся в соответствии с 9-м изданием международного "Определителя бактерий Берджи".

5. Отбор, подготовка проб (культур) и внесение

бактериальной суспензии

5.1. При работе с применением системы используются суточные бактериальные культуры, выращенные на питательной среде в соответствии с инструкцией по применению тест-планшетов и стрипов. Если исследуемый материал находился в лиофилизированном состоянии в ампулах, то необходимо восстановить культуру на питательной среде, рекомендуемой в инструкциях по применению тест-планшетов или стрипов, после чего еще раз пересеять культуру на аналогичную питательную среду.

5.2. Для внесения исследуемого материала в тест-планшеты необходимо приготовить бактериальную суспензию определенной мутности (в зависимости от типа теста) по стандартам мутности подобных Mc-Farland или ФГБУ "НЦЭСМП" или с аналогичными характеристиками.

5.3. Внесение бактериальной суспензии в лунки планшета осуществляется 8-канальным дозатором с помощью стерильных наконечников объемом 1200 мкл.

5.4. Все работы, в т.ч. пересевы, приготовление бактериальной суспензии и внесение ее в лунки планшета, осуществляют асептично с соблюдением требований биологической безопасности и техники лабораторных работ.

6. Аппаратура, материалы и реактивы

- Система, подобная МикроТакс, SY-LAB Gerate, GmbH (или Система с аналогичными характеристиками), включающая:

1) ридер МТ-1 - 8-канальный фотометр для считывания планшет со встроенным шейкером и жидкокристаллическим дисплеем; спектральный диапазон: 400 - 750 нм, 7 фильтров - 405, 414, 450, 492, 540, 620 и 690 нм; способ измерения: монохроматический, бихроматический, мультихроматический, точность 2% или 0,007 А, диапазон измерений 0 - 3,5 ед. оптической плотности;

2) инкубатор МТ-5 (внутренняя камера которого выполнена из нержавеющей стали) с жидкокристаллическим дисплеем. Диапазон температур: от 20 до 70 °С. Отклонение от температуры при 37 °С: +/- 0,5 °С, время нагрева до 37 °С - 37 мин., время охлаждения с 37 до 30 °С - 79 мин.;

3) автоматическая 8-канальная электронная пипетка с зарядным устройством;

4) управляющий блок на базе персонального компьютера с программным обеспечением и принтером.

- Тест-планшеты, подобные МикроТакс, или с аналогичными характеристиками - стандартные, 96-луночные, с внесенными компонентами:

- МикроТакс-IDS (4 теста/планшет) - для быстрой (экспресс) в течение 5 - 6 ч идентификации 113 наиболее клинически значимых штаммов энтеробактерий, стафилококков, стрептококков, энтерококков;

- МикроТакс-E (4 теста/планшет) - для идентификации 79 видов энтеробактерий за 18 - 24 ч;

- МикроТакс-NF (3 теста/планшет) - для идентификации 72 видов неферментирующих бактерий за 18 - 24 ч;

- МикроТакс-RPO (2 теста/планшет) - для идентификации 167 видов бактерий родов: стафилококки, стрептококки, энтерококки, коринебактерии, листерии;

- МикроТакс-Candida (4 теста/планшет) - для идентификации 32 видов клинически значимых грибов/дрожжей за 24 ч;

- МикроТакс-STAPH (4 теста/планшет) - для идентификации клинически значимых стафилококков за 6 и 18 - 24 ч;

- МикроТакс-STREP 2 (4 теста/планшет) - для идентификации клинически значимых стрептококков и энтерококков за 20 - 24 ч;

- МикроТакс-S бета-Lactamase detection (1 тест/планшет) - подтверждающий тест для фенотипической детекции ESBL (расширенного спектра бета-лактамазы) у грамотрицательных бактерий за 18 - 24 ч;

- МикроТакс-S MRSA & VRE (1 тест/планшет) - для детекции множественной устойчивости стафилококков (MRSA), энтерококков (VRE) и пневмококков за 18 - 24 ч;

- МикроТакс-S Anaerobs MIC (1 тест/планшет) - для определения минимальной подавляющей концентрации (МПК) антимикробных агентов с высокой активностью в отношении анаэробов за 18 - 24 ч;

- МикроТакс-S Pneumococcus & Haemophilus (1 тест/планшет) - для определения минимальной подавляющей концентрации (МПК) антимикробных агентов в отношении пневмококков и гемофильных бактерий за 18 - 24 ч;

- МикроТакс-S Campylobacter (1 тест/планшет) - для определения минимальной подавляющей концентрации (МПК) антимикробных агентов в отношении кампилобактерий за 18 - 24 ч;

- МикроТакс-S Cystic Fibrosis (1 тест/планшет) - для исследования множественной лекарственной устойчивости неферментирующих бактерий, вызывающих развитие цистита, за 18 - 24 ч;

- МикроТакс-AM KH2 (1, 2 или 4 теста/планшет) - для определения чувствительности дрожжей и криптококков к антимикотическим агентам (6 антимикотических агентов в различных концентрациях) за 22 - 24 ч;

- МикроТакс-AM MIC (1, 2 или 4 теста/планшет) - для определения чувствительности дрожжей и криптококков к антимикотическим агентам (9 антимикотических агентов в различных концентрациях) за 22 - 24 ч;

- МикроТакс-SB/быстрый тест (1, 2 или 4 теста/планшет) - для определения бактериальной чувствительности к антибиотикам за 6 ч;

- МикроТакс-SB/ночная инкубация (1, 2 или 4 теста/планшет) - для определения бактериальной чувствительности к антибиотикам за 18 - 24 ч;

- МикроТакс-UR (2 теста/планшет) - для идентификации и определения чувствительности быстрорастущих аэробных бактерий к антибиотикам за 18 - 24 ч.

- Стрипы, подобные перечисленным, или с аналогичными характеристиками:

- MIC-стрип ESBL II (1 контроль) - фенотипический подтверждающий тест для детекции ESBL (бета-лактамазы), которая продуцируется энтеробактериями;

- MIC-стрип MRSA (1 контроль) - фенотипический подтверждающий тест для детекции метициллин-резистентных стафилококков;

- MIC-стрип PEN (1 контроль) - фенотипический подтверждающий тест для детекции резистентности к пенициллину у пенициллиноустойчивых изолятов стрептококков и пневмококков;

- MIC-стрип VAN (1 контроль) - фенотипический подтверждающий тест для детекции ванкомицин-резистентных грамположительных бактерий.

- Реактивы и питательные среды:

- типа NF-Susmed, реактив для МикроТакс-NF или с аналогичными характеристиками;

- типа Candida-Susmed, реактив для МикроТакс-RC или с аналогичными характеристиками;

- изосенситест, реактив для МикроТакс-S;

- H-бульон, реактив для МикроТакс-S;

- среда МикроТакс-SB;

- индольный реагент;

- TDA-реагент;

- нитрат реагент A;

- нитрат реагент B;

- парафиновое масло;

- пептидазный реагент.

- Стандарты мутности, подобные McFarland или ФГБУ "НЦЭСМП", или с аналогичными характеристиками.

- Пластиковые расходные материалы (наконечники для пипетки, контейнер для стерилизации и хранения наконечников, 2- и 4-камерные кюветы).

Допускается применение других материалов, реактивов, питательных сред с аналогичными по назначению и свойствам характеристиками, адаптированных к системе и разрешенных к применению в установленном порядке.

7. Проведение испытаний

7.1. Идентификация микроорганизмов с применением планшетов

7.1.1. Экспресс-идентификация микроорганизмов

Для экспресс-идентификации в течение 5 - 6 ч 113 наиболее клинически значимых аэробных грамотрицательных оксидазоотрицательных бактерий и грампозитивных бактерий применяют планшеты соответствующего назначения (4 теста/планшет; 23 биохимические реакции; 1 контроль).

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Ввод и правка образцов", в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста "I" и введите код таксона.

Приготовьте бактериальную суспензию из 24-часовой культуры микроорганизмов, выращенной строго на кровяном агаре без добавок. Если проводить культивирование на иной среде, то это приведет к изменению биохимических характеристик исследуемых микроорганизмов и, как следствие, к ложным результатам. Суспензию со значением мутности 2,0 по МакФарланду необходимо приготовить в 5 мл физиологического раствора. Перенесите полученную суспензию в 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл бактериальной суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Добавьте по 2 капли парафинового масла в следующие лунки (здесь и далее порядок расположения лунок указан согласно приведенной ниже схеме планшета):

A 4 + 5 + 6, B 4 + 5, C 4 + 5 + 6, D 4 + 5, E 4 + 5 + 6, F 4 + 5,

G 4 + 5 + 6, H 4 + 5.

Схема планшета

"+" - парафиновое масло

Накройте планшет специальной перфорированной пленкой, которая прилагается к набору. Использование перфорированной пленки гарантирует проникновение кислорода, необходимого для реакций. В то же время газовый обмен между ячейками планшета, нарушающий протекание реакций, становится невозможным.

Инкубируйте 5 - 6 ч при 37 °С.

По окончании инкубации снимите покрывающую планшет пленку и добавьте по 2 капли реактивов в следующие лунки:

- пептидазный реагент - в лунки A 1 + 2 + 3, B 2, C 1 + 2 + 3, D 2, E 1 + 2 + 3, F 2, G 1 + 2 + 3, H 2;

- индольный реагент - в лунки B 1, D 1, F 1, H 1.

Подождите не менее 5 мин. (но не более 30 мин.) для развития окраски, после чего тщательно протрите дно лунок планшета фильтровальной бумагой и проведите считывание на ридере. Для этого войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Считывание". Нажмите "Старт" для начала считывания. Планшеты должны быть считаны в тот же день, на следующий день считывание невозможно.

После считывания проведите вычисление результатов. Для этого в программе MCN в колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Вычисление". Нажмите "Старт" для начала вычисления. Система выдаст полученные в ходе исследования результаты.

7.1.2. Идентификации энтеробактерий и других

грамотрицательных оксидазоотрицательных бактерий

Для идентификации энтеробактерий и других грамотрицательных оксидазоотрицательных бактерий за 18 - 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения (4 теста/планшет; 21 биохимическая реакция; 4 контроля).

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Ввод и правка образцов", в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста "Е" и введите код таксона.

Приготовьте бактериальную суспензию из 24-часовой культуры микроорганизмов, выращенной на кровяном агаре (с эритроцитами барана) или на простом питательном агаре. Если проводить культивирование на иной среде, то это приведет к изменению биохимических характеристик исследуемых микроорганизмов и, как следствие, к ложным результатам. Суспензию со значением мутности 0,5 (строго не более!) по МакФарланду необходимо приготовить в 5 мл физраствора. Перенесите полученную суспензию в 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл бактериальной суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Добавьте по 2 капли парафинового масла в следующие лунки:

B 1 + 2 определение 1

D 1 + 2 определение 2

F 1 + 2 определение 3

H 1 + 2 определение 4.

Накройте планшет E специальной перфорированной пленкой, которая прилагается к набору. Использование перфорированной пленки гарантирует проникновение кислорода, необходимого для реакций. В то же время газовый обмен между ячейками планшета, нарушающий протекание реакций, становится невозможным.

Инкубируйте 18 - 24 ч при 37 °С.

По окончании инкубации снимите покрывающую планшет пленку и добавьте по 2 капли реактивов в следующие лунки:

	ТДА-реагент	Индольный реагент
Определение 1	A1	A3
Определение 2	C1	C3
Определение 3	E1	E3
Определение 4	G1	G3

Подождите 3 - 30 мин. (не более!) для развития окраски, после чего тщательно протрите дно лунок планшета фильтровальной бумагой и проведите считывание на ридере. Для этого войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Считывание". Нажмите "Старт" для начала считывания. Планшеты должны быть считаны в тот же день, на следующий день считывание невозможно.

7.1.3. Идентификация неферментирующих грамотрицательных

оксидазоположительных бактерий

Для идентификации неферментирующих грамотрицательных оксидазоположительных бактерий за 18 - 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения (3 теста/планшет; 27 биохимических реакций; 5 контролей).

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Ввод и правка образцов", в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста "N" и введите код таксона.

Приготовьте бактериальную суспензию из 24-часовой культуры микроорганизмов, выращенной строго на кровяном агаре (с эритроцитами барана) без добавок. Если проводить культивирование на иной среде, то это приведет к изменению биохимических характеристик исследуемых микроорганизмов и, как следствие, к ложным результатам.

Суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду необходимо приготовить в 5 мл физраствора. Перенесите 1,0 мл приготовленной суспензии в 6 мл предварительно приготовленной среды NF-Susmed и перемешайте. Перенесите полученную суспензию в стерильную (стерилизация паром под давлением при 121 °С) 2-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл бактериальной суспензии в следующие лунки планшета:

A1:H4 определение 1

A5:H8 определение 2

A9:H12 определение 3.

Добавьте по 2 капли парафинового масла в следующие лунки:

B1-H1; A2, B2 определение 1

B5-H5; A6, B6 определение 2

B9-H9; A10, B10 определение 3.

Инкубируйте 18 - 24 ч строго при 28 - 30 °С. Если бактериальный рост недостаточен, то инкубируйте еще 24 ч.

По окончании инкубации снимите покрывающую планшет пленку и добавьте по 2 капли индола в следующие лунки:

	Индольный реагент
Определение 1	A1
Определение 2	A5
Определение 3	A9

Подождите не менее 3 мин. для развития окраски (но не более 20 мин. перед считыванием), после чего тщательно протрите дно лунок планшета фильтровальной бумагой и проведите считывание на ридере. Для этого войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Считывание". Нажмите "Старт" для начала считывания. Планшеты должны быть считаны в тот же день, на следующий день считывание невозможно.

7.1.4. Идентификация грамположительных кокков и палочек

Для идентификации грамположительных кокков и палочек (бактерии родов Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Corynebacteria, Listeria и др.) за 18 - 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения (2 теста/планшет; 44 биохимических реакции; 4 контроля).

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Ввод и правка образцов", в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста "Р"и введите код таксона (STA, STR, COR или BAC).

Приготовьте бактериальную суспензию из 24-часовой культуры

микроорганизмов, выращенной строго на кровяном агаре (с эритроцитами

барана) без добавок. Если проводить культивирование на иной среде, то это

приведет к изменению биохимических характеристик исследуемых

микроорганизмов и, как следствие, к ложным результатам. Медленнорастущие

бактерии, такие как бактерии родов Streptococcus, Gardnerella и некоторые

виды рода Corinebacteria, необходимо выращивать в течение 48 ч в атмосфере

5% CO .

Суспензию со значением мутности 2,0 по МакФарланду необходимо приготовить в 6 мл физраствора.

Внесите по 100 мкл бактериальной суспензии в следующие лунки планшета:

A1:D12 определение 1

E1:H12 определение 2.

Добавьте по 2 капли парафинового масла в следующие лунки:

A12-D12 определение 1

E12-H12 определение 2.

Инкубируйте 18 - 24 ч при 37 °С. Если бактериальный рост недостаточен, то инкубируйте еще 24 ч.

По окончании инкубации снимите покрывающую планшет пленку и добавьте по 2 капли пептидазного реагента в следующие лунки:

	Пептидазный реагент
Определение 1	A1 - D4
Определение 2	E1 - H4

7.1.5. Идентификация грибов и дрожжей

Для идентификации клинически значимых грибов/дрожжей за 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения (4 теста/планшет; 21 биохимическая реакция; 3 контроля).

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Ввод и правка образцов", в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста "Y" и введите код таксона.

Приготовьте суспензию из 24 - 48-часовой культуры микроорганизмов, выращенной строго на агаре Сабуро с 2%-й глюкозой. Если проводить культивирование на иной среде, то это приведет к изменению биохимических характеристик исследуемых микроорганизмов и, как следствие, к ложным результатам. Суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду необходимо приготовить в 6 мл реактива Candida-Susmed. Перенесите полученную суспензию в 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Инкубируйте 24 ч при 25 - 30 °С.

По окончании инкубирования снимите с планшета покровную пленку, тщательно протрите дно лунок планшета фильтровальной бумагой и проведите считывание на ридере. Для этого войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Считывание". Нажмите "Старт" для начала считывания. Планшеты должны быть считаны в тот же день, на следующий день считывание невозможно.

7.1.6. Идентификация стафилококков

Для идентификации клинически значимых стафилококков за 6 и 18 - 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения (4 теста/планшет; 21 биохимическая реакция; 2 контроля).

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Ввод и правка образцов", в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста ("C3" - для 6-часовой инкубации и "D1" - для 18 - 24-часовой инкубации). В поле "Код таксона" укажите бета-гемолиз +/-.

Для 6-часовой инкубации необходимо приготовить суспензию со значением мутности 2,0 по МакФарланду в 5 мл физраствора. Для 18 - 24-часовой инкубации необходимо приготовить суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду в 5 мл физраствора.

Полученную суспензию перенесите в 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Добавьте по 2 капли парафинового масла в следующие лунки:

A - H12.

В зависимости от выбранного метода инкубируйте 6 или 18 - 24 ч при 37 °С.

7.1.7. Идентификация стрептококков

Для идентификации клинически значимых стрептококков и энтерококков за 20 - 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения (4 теста/планшет; 24 биохимические реакции).

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Ввод и правка образцов", в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста "К". В поле "Код таксона" укажите бета-гемолиз +/- и пигментацию +/-.

Бактериальную суспензию со значением мутности 1,0 по МакФарланду необходимо приготовить в 5 мл физраствора. Полученную суспензию перенесите в 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Добавьте по 2 капли парафинового масла в следующие лунки:

A - H12.

Инкубируйте 20 - 24 ч при 37 °С.

7.2. Определение чувствительности микроорганизмов

к антибиотикам на планшетах

7.2.1. Определение минимальных подавляющих концентраций

антимикробных препаратов (МПК) и детекция множественной

устойчивости микроорганизмов к антибиотикам

Перечень антимикробных препаратов, чувствительность к которым можно определять с помощью планшетов, указан в инструкциях по применению соответствующих типов планшетов и включает в себя следующие антибиотики: азитромицин, амоксициллин/клавулановая кислота, ампициллин, пенициллин, бацитрацин, цефтриаксон, цефуроксим, ципрофлоксацин, кларитромицин, клиндамицин, колистин, доксициклин, эритромицин, имипинем, меропенем, моксифлоксацин, метронидазол, абактам, ванкомицин, пиперациллин, хлорамфеникол, гентамицин, стрептомицин, тетрациклин, триметоприм, налидиксовая кислота.

Для определения минимальных подавляющих концентраций (МПК) антимикробных препаратов и детекции множественной устойчивости микроорганизмов к антибиотикам за 18 - 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения:

- подтверждающий тест (1 тест/планшет, 2 контроля) для фенотипической детекции ESBL (бета-лактамазы) у соответствующих грамотрицательных бактерий за 18 - 24 ч;

- для детекции множественной устойчивости (1 тест/планшет, 1 контроль) стафилококков (MRSA), энтерококков (VRE) и пневмококков за 18 - 24 ч;

- для определения минимальной подавляющей концентрации (1 тест/планшет, 1 контроль) антимикробных агентов с высокой активностью в отношении анаэробов за 18 - 24 ч;

- для определения минимальной подавляющей концентрации (1 тест/планшет, 1 контроль) антимикробных агентов в отношении пневмококков и гемофильных бактерий за 18 - 24 ч;

- для определения минимальной подавляющей концентрации (1 тест/планшет, 1 контроль) антимикробных агентов в отношении кампилобактерий за 18 - 24 ч;

- для исследования множественной лекарственной устойчивости (1 тест/планшет, 1 контроль) неферментирующих бактерий, вызывающих развитие цистита за 18 - 24 ч.

Для всех типов указанных выше планшетов применяется одна схема работы.

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Ввод и правка образцов", в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста "Rx" ("Hx" - для медленнорастущих бактерий).

Необходимо приготовить суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду в 5 мл физраствора.

Для определения грамотрицательных бактерий необходимо перемешать 50 мкл приготовленной суспензии в 11 мл бульона Мюллера - Хинтона II.

Для определения грамположительных бактерий необходимо перемешать 100 мкл приготовленной суспензии в 11 мл бульона Мюллера - Хинтона II.

Для определения медленнорастущих бактерий (стрептококков, коринебактерий, гемофильной палочки, нейссерий) необходимо перемешать 200 мкл приготовленной суспензии в 11 мл H-бульона (H-broth).

Для определения медленнорастущих неферментирующих бактерий необходимо перемешать 50 мкл приготовленной суспензии в 11 мл H-бульона (H-broth).

Перенесите полученную суспензию в 1-, 2- или 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Накройте планшет неперфорированной пленкой, которая прилагается к набору.

Инкубируйте 18 - 24 ч при 37 °С. Медленнорастущие бактерии (при

необходимости) инкубируются в обогащенной CO атмосфере 22 - 24 ч.

Примечание: Контрольная лунка должна быть мутной (т.е. должен быть бактериальный рост). В противном случае тест должен быть повторен.

Интерпретация полученных результатов осуществляется на основании сопоставления величины МПК антимикробного препарата с пограничными значениями этих параметров, отделяющих чувствительные штаммы от промежуточных и промежуточные от устойчивых. Оценка МПК должна осуществляться в соответствии с критериями чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам и уровнями МПК, установленными в действующих нормативно-методических документах.

7.2.2. Определение чувствительности грибов

и дрожжей к антимикотикам

Для определения антимикотической чувствительности дрожжей и криптококков к противомикотическим препаратам, в т.ч. амфотерицину, флюконазолу, 5-флюороцитозину, итраконазолу, кетоконазолу, вориконазолу, за 24 - 48 ч применяют планшеты соответствующего назначения (1, 2 или 4 теста/планшет, 2 контроля):

- для определения чувствительности дрожжей и криптококков к антимикотическим агентам (6 антимикотических агентов в различных концентрациях) за 22 - 24 ч;

- для определения чувствительности дрожжей и криптококков к антимикотическим агентам (9 антимикотических агентов в различных концентрациях) за 22 - 24 ч.

Для всех типов указанных выше планшетов применяется одна схема работы.

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Ввод и правка образцов", в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста "R6".

Приготовьте суспензию из 24-часовой культуры микроорганизмов, выращенной строго на агаре Сабуро с 2%-ной глюкозой. Если проводить культивирование на иной среде, то это приведет к изменению биохимических характеристик исследуемых микроорганизмов и, как следствие, к ложным результатам.

Суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду необходимо приготовить в 4 мл физраствора. Перемешать 200 мкл полученной суспензии с 4 мл физраствора.

Приготовление суспензии для засева:

- суспензия дрожжей: перемешать 200 мкл полученной предварительно суспензии с 11 мл среды RPMI (с добавлением 50 мкл индикатора AST и 50 мкл метиленового синего);

- суспензия криптококков: перемешать 2000 мкл полученной предварительно суспензии с 11 мл среды RPMI (с добавлением 50 мкл индикатора AST и 50 мкл метиленового синего).

Полученную суспензию перенесите в 1-, 2- или 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Накройте планшет специальной неперфорированной пленкой, которая прилагается к набору (не ставьте покрытые пленкой планшеты друг на друга).

Инкубируйте 24 - 48 ч при 37 °С.

Интерпретация полученных результатов осуществляется на основании сопоставления величины МПК препарата с пограничными значениями этих параметров, отделяющих чувствительные штаммы от промежуточных и промежуточные от устойчивых. Оценка МПК должна осуществляться в соответствии с критериями чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам и уровнями МПК, установленными в действующих нормативно-методических документах.

7.2.3. Экспресс-определение чувствительности

бактерий к антибиотикам

Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам за 6 ч (определение МПК) применяют планшеты соответствующего назначения (1, 2 или 4 теста/планшет). В зависимости от разновидности планшетов спектр антибиотиков на планшете может включать: амикацин, ампициллин, цефалоспорины, хлорамфеникол, доксициклин, эритромицин, ципрофлоксацин, левофлоксацин, моксифлоксацин, оксациллин, пенициллин, пиперациллин, пиперациллин/сульбактам, имипенем, меропенем, клиндамицин, котримаксазол, гентамицин, тобрамицин, ванкомицин.

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Ввод и правка образцов", в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста "Sx".

Необходимо приготовить суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду в 5 мл физраствора.

Для определения грамотрицательных бактерий необходимо перемешать 200 мкл приготовленной суспензии в 11 мл среды МикроТакс-SB.

Для определения грамположительных и неферментирующих бактерий необходимо перемешать 400 мкл приготовленной суспензии в 11 мл среды МикроТакс-SB.

Перенесите полученную суспензию в 1-, 2- или 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Накройте планшет-тест специальной неперфорированной пленкой, которая прилагается к набору.

Инкубируйте 6 ч при 37 °С.

Примечание. Контрольная лунка должна быть мутной (т.е. должен быть бактериальный рост). В противном случае тест должен быть повторен.

7.2.4. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам

Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам за 18 - 24 ч (определение МПК) применяют планшеты соответствующего назначения (1, 2 или 4 теста/планшет). В зависимости от разновидности планшетов спектр антибиотиков на планшете может включать: амикацин, ампициллин, цефалоспорины, хлорамфеникол, доксициклин, эритромицин, ципрофлоксацин, левофлоксацин, моксифлоксацин, оксациллин, пенициллин, пиперациллин, пиперациллин/сульбактам, имипенем, меропенем, клиндамицин, котримаксазол, гентамицин, тобрамицин, ванкомицин.

Необходимо приготовить суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду в 5 мл физраствора.

Для определения грамотрицательных бактерий необходимо перемешать 50 мкл приготовленной суспензии в 11 мл среды МикроТакс-SB.

Для определения грамположительных бактерий необходимо перемешать 100 мкл приготовленной суспензии в 11 мл среды МикроТакс-SB.

Для определения медленнорастущих бактерий (стрептококки, коринебактерии, гемофильная палочка, нейссерии) необходимо перемешать 200 мкл приготовленной суспензии в 11 мл H-бульона.

Перенесите полученную суспензию в 1-, 2- или 4-камерную кювету.

Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 определение 1

C1:D12 определение 2

E1:F12 определение 3

G1:H12 определение 4.

Накройте планшет специальной неперфорированной пленкой, которая прилагается к набору.

Инкубируйте 18 - 24 ч при 37 °С. Медленнорастущие бактерии (при

необходимости) инкубируются в обогащенной CO атмосфере 22 - 24 ч.

7.2.5. Определение чувствительности аэробных

бактерий к антибиотикам

Для идентификации и определения чувствительности аэробных бактерий к антибиотикам за 18 - 24 ч применяют планшеты соответствующего назначения (2 теста/планшет, 23 биохимические реакции, 2 контроля). Перечень антибиотиков, чувствительность к которым можно определять на планшетах, включает: амоксициллин, амоксициллин/клавулановая кислота, цефахлор, цефотаксим, цефродоксим, цефтазидим, цефуроксим, ципрофлоксацин, котримаксазол, доксициклин, фосфомицин, гентамицин, левофлоксацин, нитрофурантоин, нитроксолин, норфлоксацин, оксациллин, пенициллин, пиперациллин, пиперациллин/тазобактам, триметоприм.

Ход исследования. Войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Ввод и правка образцов", в котором введите номер образца. Внизу укажите тип теста "UR1".

Приготовьте 5 мл бактериальной суспензии в физрастворе со значением мутности 0,5 по МакФарланду из 24-часовой культуры микроорганизмов, выращенной на:

- для грамотрицательных бактерий - агаре МакКонки;

- для грамположительных и неферментирующих бактерий - кровяном агаре (с эритроцитами барана) без добавок.

Если проводить культивирование на иной среде, то это приведет к изменению биохимических характеристик исследуемых микроорганизмов и, как следствие, к ложным результатам.

Ряды лунок A - B и E - F предназначены для идентификации, а ряды C - D и G - H - для определения бактериальной чувствительности к антибиотикам. Таким образом, на одном планшете Микро-Такс-UR можно проводить одновременно идентификацию и определение бактериальной чувствительности к антибиотикам у двух проб бактериальной суспензии.

Для идентификации перенесите полученную суспензию в резервуары 1 и 3 (4-камерной кюветы). Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

A1:B12 идентификация 1

E1:F12 идентификация 2.

Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам:

- для определения грамотрицательных бактерий необходимо перемешать 25 мкл приготовленной суспензии в 5 мл среды МикроТакс-SB;

- для определения грамположительных бактерий необходимо перемешать 50 мкл приготовленной суспензии в 5 мл среды МикроТакс-SB;

- для определения медленнорастущих бактерий (streptococci) необходимо перемешать 100 мкл приготовленной суспензии в 5 мл среды МикроТакс-SB.

Перенесите полученную суспензию в резервуары 2 и 4 (4-камерной кюветы). Внесите по 100 мкл суспензии в следующие лунки планшета:

C1:D12 определение бактериальной чувствительности к антибиотикам 1

G1:H12 определение бактериальной чувствительности к антибиотикам 2.

Добавьте по 2 капли парафинового масла в следующие лунки:

A 10 + 11 + 12, B 10 + 11, E 10 + 11 + 12, F 10 + 11.

Инкубируйте 18 - 24 ч при 37 °С.

По окончании инкубации снимите покрывающую планшет пленку и добавьте по 2 капли реактивов в следующие лунки:

- пептидазный реагент - в лунки A 1 + 2, B 1 + 2, E 1 + 2, F 1 + 2;

- индольный реагент - в лунки A 3, E 3.

Подождите 5 - 30 мин. (не более!) для развития окраски, после чего тщательно протрите дно лунок планшета фильтровальной бумагой и проведите считывание на ридере. Для этого войдите в программу MCN. В колонке "Работа с данными" перейдите в раздел "Считывание". Нажмите "Старт" для начала считывания. Планшеты должны быть считаны в тот же день, на следующий день считывание невозможно.

7.3. Методики исследований с применением различных

типов стрипов

Для исследований могут быть применимы типы стрипов соответствующего назначения:

- фенотипический подтверждающий тест для детекции ESBL (бета-лактамазы), которая продуцируется энтеробактериями;

- фенотипический подтверждающий тест для детекции метициллин-резистентных стафилококков;

- фенотипический подтверждающий тест для детекции резистентности к пенициллину у пенициллиноустойчивых изолятов стрептококков и пневмококков;

- фенотипический подтверждающий тест для детекции ванкомицин-резистентных грамположительных бактерий.

Для всех типов MIC-стрипов применяется одна схема работы.

Достаньте MIC-стрип из упаковки и поместите его в специальную рамку.

Необходимо приготовить суспензию со значением мутности 0,5 по МакФарланду в 5 мл физраствора.

Для определения анаэробных бактерий необходимо перемешать 200 мкл приготовленной суспензии в 11 мл реактива Wilkins-Chalgren (с добавкой НАД).

Для определения медленнорастущих бактерий (стрептококки, коринебактерии, гемофильные палочки, нейссерии) необходимо перемешать 200 мкл приготовленной суспензии в 11 мл H-бульона (H-broth).

Внесите по 100 мкл суспензии во все лунки стрипа.

Накройте MIC-стрип крышкой, которая прилагается к набору.

Инкубируйте при 37 °С в соответствии с инструкцией производителя.

По окончании инкубирования снимите с планшета покровную пленку, тщательно протрите дно лунок стрипа фильтровальной бумагой и проведите визуальную оценку опыта.

Мутность в лунке свидетельствует о наличии бактериального роста и, следовательно, о положительном результате.

Отсутствие мутности в лунке свидетельствует об отсутствии бактериального роста и, следовательно, об отрицательном результате.

Контрольная лунка должна изменить цвет с синего на розовый (т.е. должен быть бактериальный рост). В противном случае тест необходимо повторить.

Задокументируйте результаты теста.

Приложение 1

(справочное)

ПЕРЕЧЕНЬ

МИКРООРГАНИЗМОВ, ИДЕНТИФИЦИРУЕМЫХ НА ПЛАНШЕТАХ

1. МикроТакс-IDS

1. Acinetobacter lwoffii │58. Ochrobactrum anthropi

2. Acinetobacter species I │59. Pantoea agglomerans

3. Acinetobacter species II │60. Plesiomonas shigelloides

4. Acinetobacter species III │61. Proteus mirabilis

5. Acinetobacter species V │62. Proteus vulgaris

6. Aeromonas caviae │63. Providencia alcalifaciens

7. Aeromonas hydrophila │64. Providencia rettgeri

8. Aeromonas sobria │65. Providencia stuartii

9. Aeromonas veronii │66. Pseudomonas aeruginosa

10. Achromobacter denitrificans │67. Pseudomonas alcaligenes

11. Alcaligenes faecalis sub. faecalis│68. Pseudomonas fluorescens

12. Bordetella bronchiseptica │69. Pseudomonas luteola

13. Brevundimonas diminuta │70. Pseudomonas mendocina

14. Brevundimonas vesicularis │71. Pseudomonas putida

15. Burkholderia cepacia │72. Pseudomonas stutzeri

16. Cedecea davisae │73. Pseudomonas oryzihabitans

17. Cedecea lapagei │74. Rahnella aquaticus

18. Chryseobacterium indologenes │75. Ralstonia pickettii

19. Chryseobacterium │76. Rhizobium radiobacter

meningosepticum │77. Salmonella choleraesuis

20. Citrobacter amalonaticus │ sub. arizonae

21. Citrobacter freundii │78. Salmonella paratyphi A

22. Citrobacter koseri │79. Salmonella species

23. Citrobacter species 1 │80. Salmonella typhi

24. Citrobacter species 2 │81. Serratia liquefaciens

25. Comamonas testosteroni │82. Serratia marcenses

26. Delftia acidovorans │83. Serratia rubidaea

27. Edwardsiella tarda │84. Shewanella putrefaciens

28. Empedobacter brevis │85. Shigella sonnei

29. Enterobacter aerogenes │86. Shigella species

30. Enterobacter cloacae │87. Sphingobacterium multivorum

31. Enterobacter gergoviae │88. Sphingobacterium spiritovorum

32. Enterobacter sakazakii │89. Sphingomonas paucimobilis

33. Enterococcus avium │90. Staphylococcus arlettae

34. Enterococcus casseliflavus │91. Staphylococcus aureus

35. Enterococcus durans │92. Staphylococcus cohnii

36. Enterococcus faecalis │93. Staphylococcus epidermidis

37. Enterococcus faecium 1 │94. Staphylococcus gallinarum

38. Enterococcus faecium 2 │95. Staphylococcus haemoliticus

39. Enterococcus flavescens │96. Staphylococcus intermedius

40. Enterococcus gallinarum │97. Staphylococcus lentus

41. Enterococcus hirae │98. Staphylococcus lugdunensis

42. Enterococcus malodoratus │99. Staphylococcus saprophyticus

43. Enterococcus mundtii │ sub. saprophyticus

44. Escherichia coli │100. Staphylococcus schleiferi

45. Escherichia coli LDC-/ODC- │101. Staphylococcus sciuri

46. Escherichia coli PYR+ │102. Staphylococcus simulans

47. Escherichia vulneris │103. Staphylococcus xylosus

48. Ewingella americana │104. Stenotrophomonas maltophilia

49. Hafnia alvei │105. Streptococcus agalactiae

50. Klebsiella oxitoca │106. Streptococcus bovis

51. Klebsiella pneumoniae sub. │107. Streptococcus pneumoniae

pneumoniae │108. Streptococcus pyogenes

52. Kluyvera ascorbata │109. Vibrio alginolyticus

53. Kluyvera cryocrescens │110. Vibrio metschnikovii

54. Leclercia adecarboxylata │111. Vibrio parahaemolyticus

55. Moellera wisconsensis │112. Yersinia enterocolitica

56. Morganella morganii │113. Yersinia pseudotuberculosis

57. Myroides odoratus │

2. МикроТакс-E

1. Acinetobacter lwoffii │35. Morganella morganii LDC+

2. Acinetobacter species │36. Pantoea agglomerans IND-

3. Aeromonas hydrophila │37. Pantoea agglomerans IND+

4. Cedecea davisae │38. Plesiomonas shigelloides

5. Cedecea lapagei │39. Proteus mirabilis

6. Citrobacter amalonaticus │40. Proteus penneri

7. Citrobacter freundii │41. Proteus vulgaris

8. Citrobacter koseri │42. Providencia alcalifaciens

9. Edwardsiella hoshinae │43. Providencia rettgeri

10. Edwardsiella tarda │44. Providencia rustigianii

11. Enterobacter aerogenes │45. Providencia stuartii

12. Enterobacter cloacae │46. Providencia stuartii URE+

13. Enterobacter gergoviae │47. Rahnella aquaticus

14. Enterobacter sakazakii │48. Salmonella choleraesuis

15. Enterobacter cancerogenus │ sub. arizonae

16. Escherichia coli │49. Salmonella choleraesuis sub.

17. Escherichia coli H S+ │ choleraesuis

2 │50. Salmonella paratyphi A

18. Escherichia coli LDC-/ODC- │51. Salmonella pullorum

19. Escherichia coli ONPG- │52. Salmonella species

20. Escherichia fergusonii │53. Salmonella typhi

21. Escherichia hermannii │54. Serratia ficaria

22. Escherichia vulneris │55. Serratia liquefaciens

23. Ewingella americana │56. Serratia marcenses

24. Hafnia alvei │57. Serratia odorifera

25. Raoultella ornithinolytica │58. Serratia plymuthica

26. Klebsiella oxitoca │59. Serratia rubidaea

27. Klebsiella pneumoniae sub. │60. Shigella sonnei

ozaenae │61. Shigella sonnei PGUR-

28. Klebsiella pneumoniae sub. │62. Shigella species

pneumoniae │63. Stenotrophomonas maltophilia

29. Klebsiella pneumoniae sub. │64. Yersinia enterocolitica

rhinoscleromatis │65. Yersinia frederiksenii

30. Kluyvera ascorbata │66. Yersinia intermedia

31. Kluyvera cryocrescens │67. Yersinia kristensenii

32. Leclercia adecarboxylata │68. Yersinia pseudotuberculosis

33. Moellera wisconsensis │69. Yersinia ruckeri

34. Morganella morganii │

3. МикроТакс-NF

1. Acinetobacter lwoffii │32. Mannheimia haemolytica

2. Acinetobacter species │33. Mannheimia haemolytica T

3. Actinobacillus ureae │34. Pasteurella multocida

4. Achromobacter denitrificans │35. Pasteurella pneumotropica

5. Achromobacter xylosoxidans │36. Plesiomonas shigelloides

6. Aeromonas hydrophila │37. Pseudomonas aeruginosa

7. Alcaligenes faecalis sub. faecalis │38. Pseudomonas alcaligenes

8. Bergeyella zoohelcum │39. Pseudomonas fluorescens

9. Bordetella bronchiseptica │40. Pseudomonas luteola

10. Brevundimonas diminuta │41. Pseudomonas mendocina

11. Brevundimonas vesicularis │42. Pseudomonas oryzihabitans

12. Burkholderia cepacia │43. Pseudomonas pseudoalcaligenes

13. Burkholderia pseudomallei │44. Pseudomonas putida

14. CDC IVc-2 │45. Pseudomonas stutzeri

15. CDC IIc │46. Psychrobacter phenylpyruvicus

16. CDC IIf │47. Rhizobium radiobacter

17. Chromobacterium violaceum │48. Ralstonia pickettii

18. Chryseobacterium indologenes │49. Shewanella putrefaciens

19. Chryseobacterium │50. Sphingobacterium multivorum

meningosepticum │51. Sphingobacterium spiritovorum

20. Comamonas testosteroni │52. Sphingobacterium thalpophilum

21. Delftia acidovorans │53. Sphingomonas paucimobilis

22. Empedobacter brevis │54. Stenotrophomonas maltophilia

23. Flavobacterium II-h │55. Vibrio alginolyticus

24. Moraxella atlantae │56. Vibrio cholerae

25. Moraxella nonliquefaciens │57. Vibrio fluvialis

26. Moraxella osloensis │58. Vibrio furnissii

27. Myroides odoratus │59. Vibrio metschnikovii

28. Ochrobactrum anthropi │60. Vibrio mimicus

29. Oligella ureolytica │61. Vibrio parahaemolyticus

30. Oligella urethralis │62. Vibrio vulnificus

31. Pasteureila aerogenes │

4. МикроТакс-RPO

1. Actinomyces europaeus │86. Enterococcus hirae

2. Actinomyces neuii │87. Enterococcus malodoratus

3. Actinomyces radingae │88. Enterococcus mundtii

4. Actinomyces turicensis │89. Enterococcus raffinosus

5. Aerococcus viridans │90. Enterococcus saccharolyticus

6. Arcanobacterium bernardiae │91. Eysipelothrix rhusiopathiae

7. Arcanobacterium haemolyticum │92. Exiguobacterium acetylicum

8. Arcanobacterium pyogenes │93. Gardnerella speciec

9. Arthrobacter agilis │94. Kosuria kristinae

10. Arthrobacter cumminsii │95. Kosuria rosea

11. Arthrobacter spezies I │96. Kosuria varians Biotype 1

12. Arthrobacter spezies II │97. Kosuria varians Biotype 2

13. Aureobacterium spezies I │98. Kytococcus sedentarius

14. Aureobacterium spezies II │99. Listeria innocua

15. Bacillus cereus │100. Listeria ivanovii

16. Bacillus circulans I │101. Listeria monocytogenes TAG-

17. Bacillus circulans II │102. Listeria monocytogenes TAG+

18. Bacillus coagulans I │103. Listeria seeligeri

19. Bacillus coagulans II │104. Listeria welshimeri

20. Bacillus coagulans III │105. Microbacterium spezies I

21. Bacillus coagulans IV │106. Microbacterium spezies II

22. Bacillus coagulans V │107. Micrococcus luteus

23. Bacillus firmus I │108. Oerskovia turbata

24. Bacillus firmus II │109. Cellulosimicrobium cellulans

25. Bacillus lentus │110. Paenibacillus alvei

26. Bacillus licheniformis │111. Paenibacillus macerans I

27. Bacillus megaterium │112. Paenibacillus macerans II

28. Virgibacillus pantothenticus │113. Paenibacillus macerans III

29. Bacillus pumilis │114. Paenibacillus polymixa

30. Bacillus sphaericus I │115. Rothia dentocariosa I

31. Bacillus sphaericus II │116. Rothia dentocariosa II

32. Bacillus sphaericus III │117. Staphylococcus arlettae

33. Bacillus subtilis │118. Staphylococcus aureus

34. Paenibacillus thiaminolyticus │119. Staphylococcus auricularis

35. Brevibacillus brevis │120. Staphylococcus capitis sub.

36. Brevibacillus laterosporus │ capitis

37. Brevibacillus parabrevis │121. Staphylococcus capitis sub.

38. Brevibacterium casei │ ureolyticus

39. Brevibacterium epidermidis │122. Staphylococcus chromogenes

40. Brevibacterium mcbrellneri │123. Staphylococcus cohnii Biotyp 1

41. Brevibacterium otitidis │124. Staphylococcus cohnii Biotyp 2

42. Cellulomonas fimi │125. Staphylococcus epidermidis

43. Cellulomonas spezies I │126. Staphylococcus gallinarum

44. Cellulomonas spezies II │127. Staphylococcus haemolyticus

45. Cellulomonas spezies III │128. Staphylococcus hominis

46. Corynebacterium accolens │129. Staphylococcus huicus

47. Corynebacterium aferment sub. │130. Staphylococcus kloosii

aferm. │131. Staphylococcus lentus

48. Corynebacterium aferment sub. │132. Staphylococcus lugdunensis

lipophil. │133. Staphylococcus saprophyticus

49. Corynebacterium amycolatum │134. Staphylococcus schleiferi

50. Leifsonia aquatica │135. Staphylococcus sciuri

51. Corynebacterium argentoratense │136. Staphylococcus simulans

52. Corynebacterium auris │137. Staphylococcus warneri

53. Corynebacterium CDC group FI │138. Staphylococcus xylosus

54. Corynebacterium CDC group G │139. Stomatococcus spezies

55. Corynebacterium confusum │140. Streptococcus agalactiae

56. Corynebacterium coyleae │141. Streptococcus anginosus

57. Corynebacterium macginleyi │142. Streptococcus bovis Biotyp 1

58. Corynebacterium matruchotii │143. Streptococcus bovis Biotyp 2

59. Corynebacterium minutissimum │144. Streptococcus bovis Biotyp 3

60. Corynebacterium mucifaciens │145. Streptococcus constellatus

61. Corynebacterium propinquum │146. Streptococcus dysgalactiae

62. Corynebacterium │ sub. dysgalactiae

pseudodiphthericum │147. Streptococcus dysgalactiae

63. Corynebacterium │ sub. equisimilis

pseudotuberculosis │148. Streptococcus equi sub.

64. Corynebacterium renale │ zooepidemicus

65. Corynebacterium riegelii │149. Streptococcus equi sub. equi

66. Corynebacterium striatum │150. Streptococcus equinus

67. Corynebacterium ulcerans │151. Streptococcus intermedius

68. Corynebacterium urealyticum │152. Streptococcus mitis/sanguinis

69. Corynebacterium xerosis │ Biotyp 1

70. Corynebacterium diphtheriae │153. Streptococcus mitis/sanguinis

71. Corynebacterium durum │ Biotyp 2

72. Corynebacterium falsenii │154. Streptococcus mutans

73. Corynebacterium │155. Streptococcus oralis

glucuronolyticum │156. Streptococcus pneumoniae I

74. Corynebacterium glutamicum │157. Streptococcus pneumoniae II

75. Corynebacterium jeikeium │158. Streptococcus pyogenes

76. Corynebacterium kutscheri │159. Streptococcus salivarius

77. Dermabacter hominis │160. Streptococcus sanguinis

78. Dermacoccus nishiomiyaensis │161. Streptococcus suis

79. Enterococcus avium │162. Streptococcus uberis

80. Enterococcus casseliflavus │163. Tsukamurella tyrosinosolvens

81. Enterococcus durans │164. Tsukamurella inchonensis

82. Enterococcus faecalis │165. Tsukamurella paurometabola

83. Enterococcus faecium │166. Tsukamurella pulmonis

84. Enterococcus flavescens │167. Turicella otitidis

85. Enterococcus gallinarum │

5. МикроТакс-Candida

1. Candida africana │21. Candida norvegica

2. Candida albicans │22. Candida parapsilosis

3. Candida catenulate │23. Candida pelliculosa

4. Candida dubliniensis │24. Candida rugosa/pararugosa

5. Candida famata I │25. Candida tropicalis

6. Candida famata II │26. Candida utilis

7. Candida famata III │27. Candida valida

8. Candida famata IV │28. Cryptococcus albidus

9. Candida glabrata │29. Cryptococcus humicola

10. Candida guilliermondii │ Komplex

11. Candida inconspicua │30. Cryptococcus neoformans

12. Candida intermedia │31. Cryptococcus terreus

13. Candida kefyr │32. Geotrichum capitatum

14. Candida krusei │33. Geotrichum candidum

15. Candida lambica │34. Rhodotorula mucilaginosa

16. Candida lipolytica │35. Rhodotorula glutinis

17. Candida lusitaniae │36. Saccharomyces cerevisae TRE-

18. Candida magnoliae │37. Saccharomyces cerevisae TRE+

19. Candida membranefaciens │38. Trichosporon species

20. Candida norvegensis │39. Trichosporon species RAF-/MEL-

6. МикроТакс-STAPH

1. Micrococcus luteus │11. Staphylococcus hominis

2. Staphylococcus aureus │12. Staphylococcus huicus

3. Staphylococcus capitis sub. │13. Staphylococcus intermedius

capitis │14. Staphylococcus kloosii

4. Staphylococcus sub. ureolyticus │15. Staphylococcus lentus

5. Staphylococcus chromogenes │16. Staphylococcus lugdunensis

6. Staphylococcus cohnii sub. │17. Staphylococcus saprophyticus

cohnii │ sub. saprophyticus

7. Staphylococcus cohnii sub. │18. Staphylococcus schleiferi

urealyticum │19. Staphylococcus sciuri

8. Staphylococcus epidermidis │20. Staphylococcus simulans

9. Staphylococcus gallinarum │21. Staphylococcus warneri

10. Staphylococcus haemolyticus │22. Staphylococcus xylosus

7. МикроТакс-STREP 2

1. Enterococcus avium │17. Streptococcus equi sub.

2. Enterococcus casseliflavus │ zooepidemicus

3. Enterococcus durans │18. Streptococcus equinus

4. Enterococcus faecalis │19. Streptococcus gordonii

5. Enterococcus faecium │20. Streptococcus intermedius

6. Enterococcus gallinarum │21. Streptococcus mitis

7. Enterococcus hirae │22. Streptococcus mutans

8. Streptococcus agalactiae │23. Streptococcus mutans PYR+

9. Streptococcus agalactiae PYR+ │24. Streptococcus oralis

10. Streptococcus alactolyticus │25. Streptococcus pneumoniae

11. Streptococcus anginosus │26. Streptococcus pyogenes

12. Streptococcus bovis Biotyp 1 │27. Streptococcus salivarius

13. Streptococcus bovis Biotyp 2 │28. Streptococcus sanguinis

14. Streptococcus constellatus │29. Streptococcus sorbrinus

15. Streptococcus dysgalactiae sub. │30. Streptococcus suis

equisimilis │31. Streptococcus uberis

16. Streptococcus equi sub. equi │32. Streptococcus vestibularis

8. МикроТакс-UR

1. Acinetobacter species │25. Proteus mirabilis

2. Aeromonas species │26. Providencia rettgeri

3. Achromobacter species │27. Providencia alcalifaciens

4. Burkholderia cepacia │28. Providencia stuartii

5. Citrobacter amalonaticus │29. Pseudomonas aeruginosa

6. Citrobacter freundii │30. Pseudomonas putida

7. Citrobacter koseri │31. Pseudomonas species

8. Cronobacter sakazakii │32. Pseudomonas oryzihabitans

9. Enterobacter aerogenes │33. Raoulltella ornithinolytica

10. Enterobacter cloacae │34. Salmonella species

11. Enterobacter gergoviae │35. Serratia liquefaciens

12. Enterococcus durans │36. Serratia marcescens

13. Enterococcus faecalis │37. Serratia rubidaea

14. Enterococcus faecium │38. Staphylococcus aureus

15. Escherichia coli │39. Staphylococcus epidermidis

16. Hafnia alvei │40. Staphylococcus haemolyticus

17. Klebsiella oxytoca │41. Staphylococcus lugdunensis

18. Klebsiella pneumoniae sup. │42. Staphylococcus saprophyticus

pneumoniae │ sub. saprophyticus

19. Kluyvera cryocrescens │43. Stenotrophomonas maltophilia

20. Leclercia adecarboxylata │44. Streptococcus agalactiae

21. Morganella morganii │45. Streptococcus bovis

22. Pantoea agglomerans │46. Streptococcus pneumoniae

23. Plesiomonas shigelloides │47. Streptococcus pyogenes

24. Proteus vulgaris │

Приложение 2

(справочное)

ТИПЫ ПЛАНШЕТОВ (СТРИПОВ) И ИХ НАЗНАЧЕНИЕ

N п/п	Назначение планшетов или стрипов	Сроки исследования (в часах)	Тип планшетов или стрипов
1	2	3	4
1	для экспресс-идентификации 113 наиболее клинически значимых штаммов энтеробактерий, стафилококков, стрептококков, энтерококков	5 - 6	Микро-Такс-IDS
2	для идентификации 79 видов Enterobacteriaceae и др. грамотри- цательных оксидазоотрицательных бактерий	18 - 24	Микро-Такс-E
3	для идентификации 72 видов неферментиру- ющих грамотрицательных оксидазоположи- тельных бактерий	18 - 24	Микро-Такс-NF
4	для идентификации 167 видов грамположи- тельных бактерий: стафилококков, стрептококков, энтерококков, коринебактерий, листерий и пр.	18 - 24	Микро-Такс-RPO
5	для идентификации 32 видов клинически значимых грибов/дрожжей	24	Микро-Такс- Candida
6	для идентификации клинически значимых стафилококков	6 или 18 - 24	Микро-Такс- STAPH
7	для идентификации клинически значимых стрептококков и энтерококков	20 - 24	Микро-Такс- STREP 2
8	для фенотипической детекции ESBL (бета- лактамазы) у грамотрицательных бактерий	18 - 24	Микро-Такс-S бета-Lactamase detection
9	для детекции множественной устойчивости стафилококков (MRSA), энтерококков (VRE) и пневмококков	18 - 24	Микро-Такс-S MRSA & VRE
10	для определения минимальной ингибирующей концентрации (MIC) антимикробных агентов в отношении анаэробов	18 - 24	Микро-Такс-S Anaerobs MIC
11	для определения минимальной ингибирующей концентрации (MIC) антимикробных агентов в отношении пневмококков и гемофильных бактерий	18 - 24	Микро-Такс-S Pneumococcus & Haemophilus
12	для определения минимальной ингибирующей концентрации (MIC) антимикробных агентов в отношении кампилобактерий	18 - 24	Микро-Такс-S Campylobacter
13	для исследования множественной лекар- ственной устойчивости неферментирующих бактерий, вызывающих развитие цистического фиброза	18 - 24	Микро-Такс-S Cystic Fibrosis
14	для определения чувствительности дрожжей и криптококков к 6 или 9 антимикотическим агентам	22 - 24	Микро-Такс-AM KH2 или Микро- Такс-AM MIC
15	для быстрого определения бактериальной чувствительности к антибиотикам	6	Микро-Такс- SB/быстрый тест
16	для определения бактериальной чувствительности к антибиотикам	18 - 24	Микро-Такс- SB/ночная инкубация
17	для идентификации и определения чувствительности быстрорастущих аэробных бактерий к антибиотикам	18 - 24	Микро-Такс-UR
18	фенотипический подтверждающий тест для детекции ESBL (бета-лактамазы), которая продуцируется энтеробактериями	18 - 48 ч в зависимости от типа бактерий	MIC-стрип ESBL II
19	фенотипический подтверждающий тест для детекции метициллин-резистентных стафилококков	18 - 48 ч в зависимости от типа бактерий	MIC-стрип MRSA
20	фенотипический подтверждающий тест для детекции резистентности к пенициллину у пенициллин-устойчивых изолятов стрептококков и пневмококков	18 - 48 ч в зависимости от типа бактерий	MIC-стрип PEN
21	фенотипический подтверждающий тест для детекции ванкомицин-резистентных грамположительных бактерий	18 - 48 ч в зависимости от типа бактерий	MIC-стрип VAN